胞核m-csf对人宫颈癌hela细胞药物抗性的影响-effect of nucleus m - csf on drug resistance of human cervical cancer hela cells.docx

南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博/硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：导师签名：年月日年月日目录中英文缩略词表1中文摘要2英文摘要4前言6材料与方法8结果13讨论23结论26参考文献27综述34攻读硕士学位期间完成、发表论文情况44致谢45中英文缩略词表缩略词英文全称中文全称AAbsorbance吸光度DDPCisplatin顺铂DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜FCMFlowcytometry流式细胞术FCSFetalcalfserum小牛血清MTT3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide溴化四甲基偶氮唑蓝M-CSFMacrophagecolony-stimulatingfactor,巨噬细胞集落刺激因子因子PIPropidiumiodide碘化丙啶TATPaclitaxel紫杉醇S.DStandandDeviation标准差HPLCHighperformanceliquidchromatogram高效液相色谱法PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液胞核M-CSF对人宫颈癌HeLa细胞药物抗性的影响硕士研究生：陈文琦指导教师：姜浩教授唐圣松教授中文摘要目的探讨胞核M-CSF对人宫颈癌HeLa细胞药物抗性的影响。方法分别以浓度为0.2μg/mL、2.0μg/mL、20μg/mL的顺铂或紫杉醇孵育HeLa细胞、HeLa-M细胞（M-CSF稳定转染并在核定位表达的HeLa细胞）、HeLa-C细胞（空载体稳定转染的HeLa细胞）48小时后，MTT法检测细胞相对活性、台盼兰拒染法测细胞存活率。分别以浓度为0.2μg/mL、2.0μg/mL、20μg/mL的顺铂或紫杉醇孵育HeLa-M细胞、HeLa细胞、HeLa-C细胞2小时后高效液相色谱法测细胞内顺铂和紫杉醇药物浓度；WesternBlot检测Bcl-2蛋白的表达。结果MTT比色法及台盼兰细胞计数法测定结果显示：在顺铂或紫杉醇浓度为2.0μg/mL、20.0μg/mL时，HeLa-M细胞对顺铂或紫杉醇的抗性显著高于HeLa细胞、和HeLa-C细胞（p0.01）,当顺铂或紫杉醇浓度为0.2μg/mL时，三种细胞对顺铂或紫杉醇的抗性无明显差别(p0.05)。在顺铂或紫杉醇三种浓度处理后，HeLa细胞与HeLa-C细胞的药物抗性无显著差异（p0.05）。AnnexinV/PI双染色流式细胞术分析结果显示：在顺铂或紫杉醇浓度为为2.0μg/mL、20.0μg/mL时，HeLa-M细胞凋亡率明显低于HeLa细胞与HeLa-C细胞组(p0.01)，当顺铂或紫杉醇浓度为0.2μg/mL时，三种细胞凋亡率相比无明显差别(p0.05)。在上述三种浓度处理后，HeLa细胞和HeLa-C细胞凋亡率无明显差异（p0.05）。高效液相色谱检测细胞内药物浓度显示：在顺铂或紫杉醇浓度为2.0μg/mL、20.0μg/mL时，HeLa-M细胞内顺铂浓度明显低于HeLa细胞与HeLa-C细胞组(p0.01)，当顺铂或紫杉醇浓度为0.2μg/mL时，三种细胞内药物浓度相比无明显差别(p0.05)。在上述三种浓度处理后，HeLa细胞和HeLa-C细胞内药物浓度无明显差异（p0.05）。WesternBlot显示：HeLa-M细胞Bcl-2蛋白的表达明显高于HeLa细胞和HeLa-C细胞（p0.01）。结论1.胞核M-CSF降低细胞内顺铂和紫杉醇的浓度,增强人宫颈癌HeLa细胞对顺铂和紫杉醇的抗性。2.胞核M-CSF上调人宫颈