背根节慢性压迫模型小细胞交感敏化的no-cgmp-pkg信号通路分析-no - cgmp - pkg signal pathway analysis of sympathetic sensitization of small cells in chronic dorsal root ganglion compression model.docxVIP

第四军医大学硕士学位论文 第四军医大学硕士学位论文 HYPERLINK \l _bookmark0 3 实验结果 41 HYPERLINK \l _bookmark1 4 讨论 44 HYPERLINK \l _bookmark2 小 结 46 HYPERLINK \l _bookmark3 参考文献 47 HYPERLINK \l _bookmark4 个人简历和研究成果 53 HYPERLINK \l _bookmark5 致 谢 54 - - 缩略语表 缩略词 英文全称 中文全称 ACSF artificial cerebral spinal fluid 人工脑脊液 NE norepinephrine 去甲肾上腺素 SMP sympathetic maintained pain 交感维持性痛 DRG dorsal root ganglion 背根神经节 PWT paw withdraw threshold 缩足阈值 AP action potential 动作电位 CCD chronic compressed of dorsal root ganglion 慢性背根 节压 迫 NO nitric oxide 一氧化氮 cGMP cyclic guanosine monophosphate 环磷酸鸟苷 PKG protein kinases G 蛋白激酶 G SNAP S-Nitroso-N-acetylpenicillamine ODQ 1H-[1,2,4]oxadiazolo[4,3-alpha]quinoxalin-1-one S- 亚硝基 -N- 乙 酰青霉胺 1H -〔1,2 ,4〕恶 二唑〔4 ,3-a〕 喹喔啉 - 1-酮 KT5823 KT5823 PKG 抑制剂 EB evoked-bursting 诱发簇放电 第一部分 背根节慢性压迫模型小细胞交感敏化的 NO-cGMP-PKG 信号通路 硕士研究生 ：李慧明 导 师 ：邢俊玲 副教授 第四军医大学基础部神经生物学教研室，西安 710032 中文摘要 交感维持性痛（SMP）是临床一种常见的慢性痛，SMP 是指通过阻滞支 配疼痛发生区域的交感神经而得到缓解的疼痛，这类疼痛常表现出依赖交感 神经活动及循环中儿茶酚胺水平的特征，即交感敏化。交感敏化在细胞水平 的表现为交感神经刺激或肾上腺素类物质（NE）加入后，可引起神经元兴 奋性异常增高，表现为产生放电所需刺激强度的降低或原有异位自发放电的 增多。DRG 内的小细胞是传递痛觉信息的神经元。在神经病理痛过程中， 这类神经元存在超兴奋现象，有报道 C 纤维上存在交感敏化，然而其胞体上 是否存在交感敏化及参与调节其交感敏化的细胞内信号机制迄今未见报道。 本研究拟回答如下问题：（一）在背根节慢性压迫（CCD）模型背根节小细胞 上是否存在交感敏化现象？（二）CCD 模型后小细胞上如果存在交感敏化现 象，参与介导敏化的胞内信号通路是哪条？本实验按照这一思路进行研究。 目的：揭示 CCD 模型背根节小细胞上是否存在交感敏化现象及其产生的信 号通路。 方法：本研究以慢性背根节压迫模型小鼠和正常 C57 小鼠为实验对象，应用 行为学检测技术、膜片钳技术，观察损伤的 DRG 小细胞上的交感敏化现象， 在此基础上利用各种药物探讨交感敏化的细胞内信号转导机制。 结果： 1、 CCD 建模后，模型组出现痛觉过敏现象。 缩足阈值（PWT）开始下降，7d 时明显低于对照组。CCD 组与造模前 相比，造模后 7dPTW 下降至 0.13g，而对照组动物的 PWT 则一直较恒定在 0.32g。 2、 CCD 建模后小细胞出现交感敏化现象。 在 CCD 后 DRG 上直径不超过 25μm 的神经元上，应用 NE 的反应有单 纯兴奋作用、单纯抑制作用、无作用和先兴奋后抑制的作用。90 例神经元中， 单纯兴奋 58 例（64%），单纯抑制 14 例（16%），无作用 16 例（18%），先 兴奋后抑制 2 例（2%）。而正常对照组 10 例神经元中，单纯兴奋 2 例，单 纯抑制 2 例，无作用 6 例。 3、 α2 受体阻断剂可以抑制交感敏化现象的产生 在 CCD 组出现交感敏化的小细胞上，通过利用 α2 受体阻断剂育亨宾 （Yohimbine）（10μM），可以抑制交感敏化现象的产生（n=8），据此推论在 交感敏化现象中去甲肾上腺素作用受体为 α2 受体。 4、 NO-cGMP-PKG 信号通路参与介导 NE 对小细胞的兴奋的作用。 通过利用 NO 供体 SNAP（100μM），神经元的放电个数由(8.36±1.08)增 加至(11.72±1.26) ,(P0.05)；cGMP 阻断剂 ODQ 则抑制了 NE 的