白藜芦醇抑制tgf-βsmad3通路改善心肌纤维化-resveratrol inhibits tgf - β smad 3 pathway to improve myocardial fibrosis.docxVIP

目录缩略词表………………………………………………………………1 中文摘要………………………………………………………………2 英文摘要………………………………………………………………4 前言…………………………………………………………………7 实验材料…………………………………...………………………9 第一部分 大鼠 EAM/DCM 模型构建…...………………………13 实验方法14结果20讨论29第二部分 白藜芦醇对 DCM 大鼠心肌纤维化的影响………… 33实验方法35结果39讨论50结论………………………………………………..…………………53 参考文献……………………………………………..………………54 综述……………………………………….……………………….59 致谢……………………………………………….………………….68缩略词表缩略词CFCN英文全称Cardiac Fibrillar Collagen Network中文全称心脏纤维胶原网络CMCardiac myosin心肌肌球蛋白DCMDilated cardiomyopathy disease扩张型心肌病EAMExperimental autoimmune myocarditis实验性自身免疫性心肌炎FAFreunds complete adjuvant弗氏完全佐剂FSFraction shortening缩短分数HWIheart weight index心脏重量指数IVSTInterventricular septal thickness左室室间隔厚度LVEDDLeft ventricular end diastolic diameter左室舒张末期内径LVEFLeft ventricular ejection fraction左室射血分数LVESDLeft ventricular end systolic diameter左室收缩期末内径LVPWTLeft ventricular posterior wall thickness左室后壁厚度MHCMajor histocompatibility molecules主要组织相容性分子RSVResveratrol白藜芦醇RT-PCRReal-time quantitative polymerase chain reaction实时定量聚合酶链反应SIRT TGF-β VB3VMCSilence information regulator two Transforming growth factor-β Coxsackie virus B3Viral myocarditis沉默信息调节因子 2转化生长因子 β 柯萨奇病毒 B3 病毒性心肌炎白藜芦醇抑制 TGF-β/Smad3 通路改善心肌纤维化摘 要目的：研究 RSV 激活 SIRT1 在 EAM 发展至 DCM 过程中的作用，探讨 SIRT1去乙酰化对 TGF-β1/Smad3 信号通路的影响及其与心肌纤维化的关系。 方法：（一）制备 EAM /DCM 模型：30 只雄性 Lewis 大鼠随机分为两大组，（1）实 验组，于实验第 0d、7d 在大鼠左右后肢足垫注射猪心肌肌球蛋白与弗氏完全佐剂 混合乳化液；（2）正常对照组，用 PBS 代替猪心肌肌球蛋白进行注射。两大组再 按 21d、56d 和 90d 时间点分成三个亚组。对各组大鼠进行心脏超声检测后处死， 称量心脏重量与体重；取心脏组织行 HE、MASSON 和苦味酸-天狼猩红染色染色； RT-QPCR 技术检测 ColⅠ、ColⅢmRNA 的表达水平。（二）RSV 干预：20 只雄性 Lewis 大鼠随机分为四组：正常对照组、DCM 组、 RSV 低剂量组（10mg/kg/d）、RSV 高剂量组（50 mg/kg/d），每组 5 只。同上述 构建模型，于初次免疫后 28d 起，灌胃干预，每日一次。于初次免疫第 90d 后同 上述方法实行心脏超声检测，称重，病理学检查，RT-QPCR 检测心脏组织 ColⅠ、 ColⅢ、SIRT1mRNA 的表达水平；免疫共沉淀和 Western-blot 检测 SIRT1、p-Smad3、 Ac-Smad3 蛋白表达以及 SIRT1 与 Smad3 的相互作用。结果：（一）实验组与同期正常对照组比较1．心脏彩超：第 21d、56d、90d 实验组 LVEDD、LVESD 增加（P＜0.01）， 第 56d、90d 实验组左心室收缩功能明显减退，LVEF、FS 明显降低（P＜0.01）。 2．MASSON 染色与苦味酸天狼猩红染色，见心脏胶原纤维 56d 明显增多，90d弥漫性增加，呈大片网格状改变。偏振光显微镜下，以Ⅰ型胶原增加为主。3．第 21d 实验组 ColⅠ