白藜芦醇诱导白血病kg-1细胞凋亡及其作用机制的研究-resveratrol induces apoptosis of leukemia kg - 1 cells and its mechanism of action.docxVIP

英文缩写英文缩写EnglishAbbreviationMTT3一(4，5一dimethy02一thiazloy)一2，5··diphenyl-·2·-te·-trazoliumbromide0DopticaldensityFCMflowcytometryFInurescentindexDMSODimethylSulfoxideRPMIRoswellParkMemorialInsitutueHEPES4一(2-hydroxyerhyl)piperazine一1一erhanesulfonicacidPBSphosphatebuffersolutionIU’．PCRreversetrislationPCREDTAEthylenediaminetetraceticacidEBethidiumbromideTris2-Amino一2一hydroxymethyl-1，3-propanediolrpmrotationperminutemRNAMessengerribonucleicacid8河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：矽i∥俊导师签名{警等：鲺多月力矿日～蒜二。j河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：孑基唯导师虢彩够阳髫年’弓月瑙日中文摘要白藜芦醇诱导白血病K}1细胞凋亡及其作用机制的研究摘要目的：研究白藜芦醇体外对KG．1细胞株抗肿瘤作用及诱导细胞凋亡作用，并探讨其作用机制，为白藜芦醇在抗肿瘤方面的临床应用提供实验依据。方法：l以人自血病KG。1细胞株为研究对象，设对照组和加药组(白藜芦醇终浓度分别为12。5、25、50、100、2001xmol／L)，处理KG-1细胞24，48，72h后，MTT法检测细胞增殖抑制率。2对照组和加药组(自藜芦醇终浓度分别为50、1009m01／L)处理KG．1细胞48h后，流式细胞技术检测细胞凋亡率和细胞周期分布变化。3对照组和加药组(白藜芦醇终浓度为1009mol／L)处理KG．1细胞48h后，瑞．吉染色及透射电镜观察凋亡细胞形态学变化。4对照组和加药组(白藜芦醇终浓度为50、1009m01／L)处理KG．1细胞48h后，流式细胞技术检测Bcl．2／Bax蛋白的表达，分光光度法检测Caspase。3活性变化，用半定量RT-PCR技术检测bGl．2、bax和caspase．3mRNA的表达水平，分析自藜芦醇诱导KG。1细胞凋亡的可能机制。结果：1与对照组比较，不同浓度白藜芦醇作用24h，48h，72h中文摘要后对KG-l细胞均有生长抑制作用(正O。05)，24、48、72h各浓度组抑制率如下：12．5lxrnol／L依次为4．67％，17．18％，28．89％；259m01／L9．99％，20．74％，35．14％；50pmol／L依次为13．12％33．03％52．54％；1001xmol／L依次为21．93％，42．55％，62．67％；200pmol／L依次为29．O％，56．88％，76．15％；最大抑制率达76．15％(2001am01／L终浓度作用72h后)。在同一浓度下，自藜芦醇对KG．1细胞的生长抑制作用随作用时间的延长而增强；在一定时间内，白藜芦醇对KG。1细胞的生长抑制作用随作用浓度的增加而增强；白藜芦醇对KG．1细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖性。2与对照组比较，不同浓度(50、1001amol／L)自藜芦醇作用于白血病KG．1细胞48h后，S期细胞比例增加，由(41．4-4-0．81)％到(77．5土0．50)％，而Go／Gl期细胞和GjM期细胞比率显著下降，白藜芦醇使细胞发生了S期阻滞；对照组细胞凋亡率为(1．17+0．35)％，丽自藜芦醇处理组细胞凋亡率分别上升到(7。35+1。33)％和(16．21圭2。1)％。3白藜芦醇(1009mol／L)作用于白血病KG．1细胞后，可诱导较典型的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变，如细胞体积缩小，染色质浓缩，核膜成锐角突起，胞质空泡变性，线粒体、粗面内质网等细胞器减少，有的出现核固缩、核碎裂等。4不同浓度白藜芦醇(50、1001amol／L)作用于KG．1细胞48h后，流式细胞术检测结果Bcl．2蛋白表达的