不同刺激物对大鼠吞噬细胞吞噬能力及ca2i浓度影响-effect of different irritants on phagocytic ability and ca2i concentration of rat phagocytes.docxVIP

i不同刺激物对大鼠吞噬细胞吞噬能力及胞内钙离子([Ca2+])浓度的影响摘要目的：巨噬细胞和中性粒细胞的反应性对炎症过程至关重要。本研究观察N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰苯丙氨酸（N-formyl-methionyl-leucy1-phenylalanine，fMLP）、豆蔻酰佛波醇乙酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）及白三烯B4(LeukotrieneB4，LTB4)诱导大鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞吞噬能力的变化，并以细胞内游离钙离子浓度（[Ca2+]i）为指标，测定了静息状态下腹腔巨噬细胞和中性粒细胞内[Ca2+]i水平及其对fMLP、PMA、LTB4的反应性。方法：大鼠腹腔内注射5%明胶生理盐，16h后脱颈处死，灌洗腹腔并收取腹腔渗透液，洗涤后，通过密度梯度离心法分离巨噬细胞及中性粒细胞。对分离后得到的巨噬细胞及中性粒细胞进行以下两方面的研究：1.使用荧光显微镜和相差显微镜对中性粒细胞和巨噬细胞对荧光微球和酵母多糖的吞噬能力的检测。2.将分离的吞噬细胞用Fura-2/AM（终浓度为5μmol/l）负载1h，洗涤去除未进入细胞内的Fura-2/AM，采用细胞内离子测定仪（双波长荧光分光光度计），在激发波长为340nm和380nm，发射波长为510nm条件下测定细胞内[Ca2+]i的动态变化。结果：1.静息状态下，巨噬细胞对荧光微球的吞噬能力显著大于中性粒细胞；经fMLP、PMA、LTB4诱导后，巨噬细胞及中性粒细胞对荧光微球的吞噬能力增强。2.静息状态下，巨噬细胞内[Ca2+]i浓度高于中性粒细胞；不同浓度fMLP、PMA及LTB4作用下，[Ca2+]i变化都具有浓度依赖性；经LTB4诱导，[Ca2+]i呈一过性增高，持续时间较短，约大概1min后恢复到静息状态的浓度；经fMLP诱导后，[Ca2+]i亦呈一过性增高，但持续时间较长，其[Ca2+]i浓度缓慢下降，具有时间和浓度依赖性；在高浓度的fMLP刺激下，约10min后恢复到静息状态的浓度；经PMA诱导后，[Ca2+]i增高幅度最大，持续时间最长，观察45min后也无下降趋势。结论：中性粒细胞与巨噬细胞的吞噬能力不同；fMLP、PMA及LTB4能诱导大鼠中性粒细胞与巨噬细胞的的吞噬能力提高；fMLP、PMA及LTB4诱导引起大鼠中性粒细胞与巨噬细胞[Ca2+]i浓度发生浓度依赖性增高，持续时间也各不相同。该研究结果显示，不同刺激物对细胞的活化途径不同，而吞噬细胞的反应性（活化程度）也不同。[关键词]大鼠；中性粒细胞；巨噬细胞；吞噬能力；胞内钙离子浓度中图分类号R392文献标识码A英文摘要DifferentirritantsontheratphagocytecapacityandIntracellularcalciumconcentration[Ca2+]iAbstractObjectiv:Theresponseofmacrophagesandneutrophils,playsanimportantroleintheinflammatoryprocess.ThecurrentstudyfoundthatfMLP,PMAandLTB4-inducedperitonealmacrophagesandneutrophilsandthetwocellsinintracellularfreecalciumconcentrationchanges[Ca2+]iphagocyticfunction,suchasdifferentstyimulus.Intracellularfreecalciumconcentrationandmeasuredtherestingperitonealmacrophagesandneutrophils[Ca2+]ilevelsandreactivityoffMLP,PMA,LTB4.Method:Abdominallavageandchargeabdominalpermeate,afterwashing,macrophagesandneutrophilsisolatedbydensitygradientcentrifugation.1,Usingoffluorescencemicroscopyandphasecontrastmicroscopyandneutrophilphagocyticcellsoffluorescentmicrospheresandyeastphagocyticcapacitytest.2,TheseparationofphagocyticcellswithFura-2/AM(finalconcentrationofload1h5μmol/L),washedtoremovedidnotentert