不同分化状态的人多巴胺能sh-sy5y细胞对狄氏剂作用敏感性的研究-study on the sensitivity of human dopaminergic sh - sy5y cells in different differentiation states to dieldrin.docxVIP

英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称RAall-trans-retinoicacid全反式视黄酸TPAphorbolester12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate佛波醇酯MTT3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide四噻唑兰DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜BCABicinchoninicacid双金鸡宁酸THtyrosinehydroxylase酪氨酸羟化酶EDTAEthylenediaminetetra-aceticacid乙二胺四乙酸FBSFetalbovineserum胎牛血清PFAparaformaldehyde多聚甲醛SPSSStatisticalpackageforthesocialscience社会科学统计软包TabTable统计表FigFigure统计图ANOVAAnalysisofvariance方差分析不同分化状态的人多巴胺能SH-SY5Y细胞对狄氏剂作用敏感性的研究中文摘要1.研究背景狄氏剂（分子式为C12H8Cl6O）是19世纪在全世界广泛应用的一种有机氯类农药，可能通过多种接触途径产生神经毒性作用。体内外研究均提示，多巴胺能系统对狄氏剂特别敏感。帕金森患者脑组织检查结果也提示，狄氏剂和帕金森病很可能存在病因关系。SH-SY5Y细胞系来源于儿童成神经细胞瘤，可表达多种多巴胺能的标记物[如酪氨酸羟化酶（TH）、多巴胺转运体（DAT)]，常被作为多巴胺能神经元模型用来研究帕金森病的发病机制。在实验研究中，常用各种分化因子[如全反式视黄酸（RA）或佛波醇酯（TPA）]来诱导SH-SY5Y细胞的分化，使其表现出多巴胺能神经元特性；也有很多研究直接使用未分化的SH-SY5Y细胞。目前，有关未分化和分化的SH-SY5Y细胞对神经毒物的敏感性尚存在争议。2.研究目的以SH-SY5Y细胞作为人多巴胺能神经元培养模型，采用RA诱导细胞分化，观察并比较狄氏剂对其在未分化、分化过程中及分化相对完成三种状态下的细胞毒性；在此基础上研究狄氏剂对SH-SY5Y细胞分化的影响，以期探讨狄氏剂对神经发育关键环节的影响。方法以人多巴胺能SH-SY5Y细胞为模型，按1×104个/孔和5×103个/孔的密度将细胞传至96孔板，用10μMRA分别诱导分化0,4和7天，以1、3、10、30、100μM的狄氏剂对细胞染毒24小时，MTT法测定细胞存活率和LIVE/DEAD细胞活性/细胞毒性检测细胞死亡率；运用考马斯亮蓝染色法，观察狄氏剂处理SH-SY5Y细胞分化中期24h后的细胞分化率。统计学处理：所有实验结果均以x±s表示。采用SPSS13.0软件进行统计分析。多组间比较采用方差齐性检验和单因素方差分析（OneWayANOVA）。进一步进行组间两两比较时，若方差齐时，采用SNK检验（Student-Newman-Keuls法）；若方差不齐时，采用Games-Howell检验。率间的比较采用χ2检验。各因素相关性分析采用非参数Spearman相关分析。以P0.05为差异有统计学意义。结果MTT试验结果显示，狄氏剂可引起SH-SY5Y细胞存活率呈剂量依赖性下降（均P0.01），分化中（4d）的细胞与未分化（0d）和完成分化（7d）的细胞相比，存活率在较低剂量（3μM）就有明显下降（P0.05）。LIVE/DEAD染色结果显示，狄氏剂可引起SH-SY5Y细胞死亡率呈剂量依赖性增高（均P0.05），分化中（4d）的细胞与未分化（0d）和完成分化（7d）的细胞相比，死亡率在较低剂量（3μM）也有明显增高（P0.05）；分化的细胞较未分化的细胞死亡率更高（P0.05），而分化中（4d）的细胞在100μM剂量时又比完成分化（7d）的细胞死亡率更高（P0.05）。考马斯亮蓝染色结果显示，狄氏剂在3μM的剂量下可以明显的影响分化中（4d）SH-SY5Y细胞的分化（P0.05）。结论分化中的人多巴胺能SH-SY5Y细胞对狄氏剂毒作用最敏感；对分化中细胞产生细胞毒性的狄氏剂剂量也能够明显抑制细胞分化。这些结果提示，狄氏剂暴露可能主要通过影响神经元细胞存活和分化的关键环节而产生神经发育毒性。6.关键词狄氏剂；人成神经瘤细胞系；细胞分化AStudyonSensitivityofDieldrinToxicityonHumanDopaminergicSH-SY5YCellsatDifferentStagesofDifferentiationAbstractBackgroundDieldrinbelongstoorganochlorinesandwasdevelopedinthemiddleofthelastcentury,itmayprod