白血病抑制因子调控哮喘气道神经源性炎症的初步分析-preliminary analysis of leukemia inhibitory factor regulating airway neurogenic inflammation in asthma.docxVIP

摘要支气管哮喘(简称哮喘)是以慢性气道炎症、气道高反应性以及 间歇性可逆性气道阻塞为主要特征的呼吸系统常见病、多发病，对人 类的健康危害极大。其发病机制还不完全清楚，目前认为，哮喘发病 过程中免疫系统和神经系统等诸多因素之间存在着复杂的相互作用 关系网，它是一个多步骤的过程，涉及到大量的细胞因子，炎症介质 和神经递质。近年来，越来越多的证据表明支配肺组织和气道的自主神经功能 紊乱及功能障碍在哮喘的发病机制中占据着重要地位，“神经源性气道 炎症”这一概念的提出也日益受到国内外学者的关注。现己证实由气道 感觉神经末梢释放的速激肽P物质(substance P，SP)、神经激肽A (neurokinin A，NKA)和神经激肽B(neurokinin B，NKB)是介导神 经源性气道炎症的主要介质，它们通过作用于三种不同的速激肽受体 (NKl，NK2和NK3受体)，可引起气道平滑肌收缩，微血管漏出， 粘液分泌，促进炎症介质释放以及加重气道高反应性。因此，对调控 上述神经肽及其受体表达的化学物质进行研究，是阻断气道神经源性 炎症的关键所在。神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是目前研究较为深入的 参与神经源性气道炎症调控的细胞因子，它对神经系统和免疫系统具 有双向调节作用。白血病抑制因子(1eukemia inhibitory factor,LIF)和 NGF有类似的生物学特性，研究表明它在呼吸系统炎症性疾病中表达 是增高的。我们假设LIF参与了哮喘神经源性气道炎症的调控。为了I探讨LIF在哮喘神经源性气道炎症的作用机制，本课题在建立大鼠哮 喘模型基础上，采用RT-PCR和Western．blot方法对大鼠哮喘肺组织 中LIF，NKl和NK2受体的表达进行了mRNA转录水平和蛋白水平 的检测，通过免疫组化方法初步确定NKl受体(neurokinin receptor 1， NK一1R)的组织分布情况，选择NK．1R高表达的细胞与重组人L／F (rhLIF)共培养，考察外源性LIF对细胞表达NK-1R的影响。首先，制备卵蛋白致敏大鼠哮喘模型，采用RT-PCR和Western．blot 方法检测LIF在致敏大鼠肺组织中的表达情况。结果显示：LIF蛋白 表达水平在哮喘组为(40832±12964)，均较地塞米松组(16160_+2108) 和对照组(23110+_8018)升高，差异有显著性(P．O．01)，地塞米松组 与对照组之间无显著性差异(P0．05)。LIF mRNA的相对表达量哮喘 组为(0．51_+0．13)，均较地塞米松组(0．18_+0．05)和对照组(0．24_+0．02) 明显增高，差异有显著性(P0．01)，地塞米松组与对照组之间LIFmRNA的表达水平无显著性差异(D．0．05)。该结果提示LIF可能作为促炎因子参与了哮喘的发病过程。同样我们比较了NK-1R和NK．2R在哮喘组、对照组和地塞米松 组大鼠肺组织中的表达差异。结果显示：NK-1R蛋白表达量在哮喘组 为(32292_+4564)，均较地塞米松组(15018_+1488)和对照组 (16538_+4342)升高，差异有显著性(P0．01)，地塞米松组与对照 组之间无显著性差异(D．0．05)。NK-1R mRNA的相对表达量在哮喘 组为(1．04-+0．48)，均较对照组(0．24_+0．02)和地塞米松组(0．17_+0．04) 明显增高，差异有显著性(PO．01)，地塞米松组与对照组之间NK-1RmRNA的表达水平无显著性差异(PO．05)。NK一2R mRNA在哮喘组、 对照组和地塞米松组大鼠肺组织的相对含量分别为(0．20±0．03)， (0．24±O．04)和(O．21±0．04)，三组间NK一2R mRNA表达水平无显著 性差异(F=0．705，P0．05)。免疫组化结果显示，NK一1R分布于支气 管粘膜上皮、粘膜下腺和支气管平滑肌，以支气管粘膜上皮细胞染色 最为明显。在哮喘组NK一1R与HF分别在mRNA表达水平和蛋白表达水平呈正相关(尸0．01，rl=O．850，r2=O．868)。上述研究结果提示哮喘 大鼠模型气道中可能存在神经源性炎症，哮喘大鼠肺内NK．1R主要分 布于支气管粘膜上皮细胞，哮喘大鼠肺组织N艮1R表达增加可能与 LIF升高有关。为进一步探讨LIF对哮喘神经源性气道炎症的调控机制，我们选 择了人支气管上皮细胞株(HBEl6)进行培养，将浓度为5n∥ml的 rhHF与HBEl6分别共培养6小时，12小时，24小时后，提取细胞 RNA和蛋白，再应用RT-PCR和Western—blot方法检测NK-1R的表达 情况，结果显示5n∥ml的rhUF作用24小时后，支气管上皮细胞表达NK．1R mRN