2018年最新样本采集指南.docxVIP

们科研人的日常是什么？看文献！看文献！做实验！还有…实验失败重新做实验！也是Real令人心疼了。大家天天看文献，做实验，再看文献，做实验，有时候可能忽略了最最基础的步骤---采样。样本是后续一切的基础，样本都没取好，实验结果怎么能好呢？我这里整理了取样方法给大家参考。取样基本原则代表性和一致性原则实验组与对照样本在取材部位、时间处理过程等方面尽可能保持一致，从而保证实验的可信度。迅速性原则样本质量是影响实验结果的重要因素，因此用于研究的样本，在采集、制备、贮存、运输过程中应尽可能地做到迅速，最大限度的缩短样本从采集到实验的时间。低温原则所取样本离体后，如有分离步骤应在4 ℃或冰上等低温条件下进行，分离好的样本立即置于液氮、干冰或-80 ℃冰箱中，并保证在实验前始终处于-70 ℃以下，以免样本产生进一步代谢活动。取样方法参考组织样本抽提核酸类型：DNA、RNA组织量：100mg具体取样步骤：准备好冻存管，用油性记号笔在管壁标清楚样本信息;准确切取所需部位的组织，最好切为细长薄块;在RNase-free的0.9%生理盐水中迅速漂洗样品，以去除血渍和污物;迅速放入冻存管，旋上盖子，迅速投入液氮冷冻15min以上;（或者迅速将组织完全浸入组织保存液中）将冻存管装入样品袋，标记清晰;?将样品袋转移到干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。贴壁细胞样本抽提核酸类型：DNA细胞量：1X10^6个参考取样步骤：可用刮棒刮取或胰酶消化，离心收集细胞；使用油性记号笔标记清楚样本信息；直接抽提DNA或转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。抽提核酸类型：RNA细胞量：1X10^6个参考取样步骤：贴壁细胞培养或处理结束后，去除培养液；按每10cm^2培养面积加1mL TRIZOL试剂的比例加入TRIZOL试剂；用1mL枪头反复吹打，使TRIZOL接触所有长有细胞的培养瓶表面以进行充分消化；转移到RNase-free的EP管中反复吹打细胞直至看不见成团的细胞块，整个溶液应该为清亮而不粘稠的状态；使用油性记号笔标记清楚样本信息；转移至干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。悬浮细胞样本抽提核酸类型：DNA细胞量：1X10^6个参考取样步骤：悬浮细胞培养或处理结束后，离心（1500g,4℃离心10min）去除培养液；将保留的细胞用PBS缓冲液快速洗一次，离心除去PBS缓冲液，收集细胞；使用油性记号笔标记清楚样本信息；直接抽提DNA或转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。抽提核酸类型：RNA细胞量：1X10^6个参考取样步骤：悬浮细胞培养或处理结束后，离心（1500g,4℃离心10min）去除培养液；保留的细胞用PBS缓冲液快速洗一次，离心除去PBS缓冲液；按照每10^6个细胞加1mLTRIZOL的比例加入TRIZOL试剂，反复吹打细胞直至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮而不粘稠的状态；使用油性记号笔标记清楚样本信息；转移至干冰或-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。全血样本抽提核酸类型：DNA全血量：2mL参考取样步骤：用（非肝素钠）抗凝管采取血液样本；使用油性记号笔标记清楚样本信息；转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。抽提核酸类型：RNA全血量：2mL参考取样方法1：提前准备3倍体积的TRIZOL LS （Invitrogen）；用（非肝素钠）抗凝管采集血液样本；将抗凝血加至TRIZOL LS（裂解液）中，迅速立即摇匀；使用油性记号笔标记清楚样本信息；裂解液室温均匀裂解10min后，转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。参考取样方法2（?推荐）：采用PAXgene Blood RNA Tube 采集全血；采集血液后，立即上下颠倒10次以上混匀；使用油性记号笔标记清楚样本信息；室温放置至少2小时后，转移至4℃或-20℃过夜放置。足量干冰寄送。血浆样本抽提核酸类型：DNA样本量：1mL参考取样步骤：用（非肝素钠抗凝的）真空采血管采集血液样本，2小时内进行血浆分离；3000rpm/min，室温离心10min，收集上清至1.5mL/2mLEP管；使用油性记号笔标记清楚样本信息；转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。抽提核酸类型：RNA样本量：1mL参考取样步骤：用（非肝素钠抗凝的）真空采血管采集血液样本，2小时内进行血浆分离；3000rpm/min，离心10min，收集上清，0.2mL/管分装至1.5mL/2mLEP管；加入3倍体积的TRIZOL（裂解液），立即用力摇匀；使用油性记号笔标记清楚样本信息；裂解液均匀裂解10min后，转移至-80℃冰箱中保存。足量干冰寄送。血清样本抽提核酸类型：DNA样本量：1mL参考取样步骤：用离心管（不抗凝）采集血液样本，37℃（或室温）静置1小时凝固分层；3000rpm/min，离心10min，收集上清，分装至1.5m