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聚合酶链式反应过程中污染预防与对策 　　【摘要】目的：讨论聚合酶链式反应过程中污染的预防与对策，保证日常临床检验基因扩增的质量。方法：聚合酶链反应技术。 结果：严格按操作规程操作，防止假阳性，假阴性结果的产生。 　　【关键词】聚合酶链式反应； 污染；对策 　　Prevention of pollution and Countermeasures in the process of polymerase chain reaction NiuYuSen 　　Wu Weishi peoples hospital office （ 733000） 　　【Abstract】Objective Discussion on the prevention of pollution and Countermeasures inpolymerase chain reaction process， ensure the quality of routine clinicalexamination of gene amplification.Methods of polymerase chain reaction technology. Results according to strict operation regulations， prevent false positive， false negative results. 　　【Key words】Polymerase chain reaction ；pollution； countermeasures 　　【中图分类号】R51 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2014）04-0018-02 　　聚合酶链式反应（英文全称：Polymerase Chain Reaction），简称PCR技术。该技术可将极微量的靶DNA特异的扩增上百万倍，从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力。被广泛的应用于感染性病原体，如HBV、HCV各种性病病原体等的检测。该反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，操作复杂，所以在操作过程中常有污染发生，即使极少量的污染也会造成假阳性，稍有差错就会出现假阴性。 　　1 污染原因 　　1.1 污染原因无论哪种情况，污染是由于操作者操作不干净引起的。 　　1.1.1 来自实验材料污染：如重组克隆的D.A、或者来自同一次PCR的扩增产物污染。主要是由于PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。 　　1.1.2 标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 　　1.1.3 PCR扩增产物污染。这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大（一般为1013拷贝/m1），远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳性。 　　1.1.4 还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染。在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。 　　1.1.5 实验室中克隆质粒的污染。在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见。因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力，其污染可能性也很大。 　　2 防止污染的预防与对策 　　2.1 合理分隔实验室。在理想的条件下，PCR应该在一间单独的实验室内进行操作，较为实际的选择是在实验室中为设置PCR划出特定的区域：将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行，特别注意样本处理及PCR产物的鉴定应与其它步骤严格分开。最好能划分①标本处理区；②PCR反应液制备区；③PCR循环扩增区；④PCR产物鉴定区。其实验用品及吸样枪应专用。实验前应将实验室用紫外线消毒以破坏残留的D.A或R.A。 　　2.2 吸样枪。吸样枪污染是一个值得注意的问题。由于操作时不慎将样品或模板核酸吸入枪内或粘上枪头是一个严重的污染源，因而加样或吸取模板要十分小心，吸样要慢，吸样时尽量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或产生气溶胶污染。 　　2.3 预混和分装PCR试剂。必须使用卫生部或国家权威机构指定厂家生产的试剂和未过期的试剂。所有的PCR试剂都应小量分装，如有可能，PCR反应液应预先配制好，然后小量分装-20℃保