脉络宁对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及其机制研究.docVIP

脉络宁对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及其机制研究 　　[摘要] 目的：探讨脉络宁注射液对大鼠脑缺血再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）损伤的保护作用及其机制。方法：健康成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉对照组（3 mg?kg-1）、脉络宁高、中、低剂量组（4，2，1 mL?kg-1），每组10只，尾静脉注射给药。采用线栓法阻断大脑中动脉（ middle cerebral artery occlusion，MCAO）建立大鼠I/R模型。缺血2 h，再灌注24 h时后，HE染色观察大鼠缺血侧脑组织神经血管单元（neurovascular unit，NVU）的病理变化，免疫组织化学法检测胶质纤维酸性蛋白（glialfibrillary acidic protein，GFAP） 及离子钙接头蛋白（ionized calcium binding adaptor molecule 1，Iba1）的表达，蛋白免疫印记法检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-1β （interleukin 1β，IL-1β）、血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-l）、细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）的表达。结果：脉络宁注射液明显改善缺血再灌注大鼠脑组织NVU的病理变化；减少GFAP和Iba1阳性细胞的数量；显著降低缺血再灌注大鼠脑组织TNF-α，IL-1β，ICAM-1，VCAM-1的表达。结论：脉络宁注射液对脑缺血再灌注大鼠神经血管单元具有明显的保护作用，其机制可能涉及抑制星形胶质细胞和小胶质细胞的激活，以及多种炎性因子的分泌和表达。 　　[关键词] 脉络宁；缺血/再灌注；神经血管单元；神经胶质细胞；炎症介质 　　脑卒中（stroke），中医称为中风，是严重威胁人类生命与健康的三大疾病之一。过去人们对中风治疗药物的研究多集中于神经元的保护方面，却经常出现动物实验有效、临床试验无效的现象[1]。基于上述问题，越来越多的研究将视角从单一的神经元转向神经元、胶质细胞、血管内皮细胞等组成的复合体――神经血管单元（neurovascular unit，NVU）[2]。神经血管单元是美国国立神经病学与卒中研究所（National Institutes of Neurological Disordersand Stroke，NINDS） 提出的一个中风治疗的概念模型，是神经系统的结构和功能单位，它的结构成分包括内皮细胞、星形细胞、周细胞、基底膜、小胶质细胞、神经元以及细胞外基质[3]。神经血管单元这一概念将中风置于一个整合的组织反应的关联之中，所有的细胞及基质成分参与组织损伤的过程，并非只是神经元或血管参与病理反应。这一概念为中风治疗带来了新的机遇。 　　脉络宁注射液是在著名医方“四妙勇安汤”的基础上，以中医理论为指导，采用中西医结合的方法研究成的中药复方注射剂，由金银花、牛膝、玄参、石斛组成，具有清热养阴、活血化瘀等功效[4]。现代医学研究表明，脉络宁注射液具有降压、扩张血管、改善微循环、抗缺血损伤、保护心脑组织等作用[5]。临床上常用来治疗缺血性脑血管病，疗效可靠，副作用小，但是，目前有关脉络宁注射液对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制的研究报道较少。 　　本实验采用大脑中动脉内线栓法（middle cerebral artery occlusion，MCAO）建立大鼠脑缺血再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）模型[6]，通过观察缺血区脑组织神经血管单元病理变化，着重检测神经血管单元中胶质细胞的激活与缺血再灌注后细胞因子、黏附分子等炎性介质的表达，从整体、细胞、分子水平探讨脉络宁注射液对脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用及其机制。 　　1 材料 　　1.1 动物 60只成年健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，SPF级，体重280～300 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号SCXY（京）2010-0009。实验过程中大鼠的饲养环境稳定，室温（25±2） ℃，相对湿度（55±5）%，灯光控制12 h昼夜交替。对实验动物的所有操作均符合中国实验动物伦理学的要求。 　　1.2 药物 脉络宁注射液（金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂，批号；依达拉奉注射液（国药集团国瑞药业有限公司，批号 201110302）。 　　1.3 试剂 兔抗鼠GFAP抗体，兔抗鼠Iba1抗体购自Vector公司；兔抗鼠TNF-α抗体、兔抗鼠IL-1β、兔抗鼠VCAM-l抗