高效液相色谱法在抗生素质控分析中应用.docVIP

高效液相色谱法在抗生素质控分析中应用 　　【摘要】论述高效液相色谱法在抗生素质控分析中的应用。本文主要以罗红霉素胶囊为例，阐述了高效液相色谱法在抗生素的鉴别，相关物质检查及含量测定上的应用。方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.067mol/L磷酸二氢铵溶液（用三乙胺调节PH值至6.5）-乙腈（65：35）为流动相，检测波长210nm。精密称取罗红霉素对照品和红霉素标准品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中各约含1mg的混合溶液，取20ul注入液相色谱仪，罗红霉素峰的保留时间约为14分钟，其与红霉素峰的分离度应不小于15.0，罗红霉素峰与相对保留时间约为0.95处杂质峰的分离度应不小于1.0，与相对保留时间约为1.2处杂质峰的分离度应不小于2.0。结论：本法操作简单、快速，结果准确，为进一步研究其它抗生素质量标准提供了一个很好的途径。 　　【关键词】高效液相色谱法；罗红霉素胶囊；鉴别；相关物质检查；含量测定 　　【中图分类号】R917【文献标识码】A 　　【文章编号】2095-6851（2014）05-0504 　　1前言 　　高效液相色谱分析法在中国药典所有分析方法中所占比例远远低于同时期发达国家的药典，如美国药典，英国药典等。中国药典1985年版第一次作为一种药物分析法载入药典，并从1995年版起被广泛用于对抗生素药品的质控分析，同时在药典所有分析方法中，它也是发展最快的。本法具有高效、高速、高灵敏度的特征，广泛用于药品的含量测定，杂质检查及定性分析等方面，是一种理想的药品分析方法。 　　抗生素的分离、分析和含量测定是药物分析中较困难的领域，采用较多的方法是微生物法，分光光度法和化学方法，但所需时间较长，专一性较差。对结构、组分等较清楚的抗生素药物，高效液相色谱分析将逐步取代传统的生物测定。目前，各国药典中应用高效液相色谱分析技术，对抗生素进行质量控制的项目包括鉴别、组分分析、含量测定和相关物质测定等。为了保证此分析方法具有高度的重现性，在建立方法时应充分考虑各种因素对试验结果的影响，并在此基础上选择合理的指标，建立适当的系统适应性试验方法。 　　罗红霉素为新一代大环内酯类抗生素。中国药典2000年版收载，采用微生物效价测定其含量，不仅操作时间长，且操作繁琐，影响因素较多，现行版药典采用高效液相色谱法对其进行鉴别，有关物质检查及含量测定，该法具有操作简便、快捷、灵敏度高、结果准确等特点，从而为控制罗红霉素胶囊的质量提供了切实可行的方法。 　　2试验部分 　　2.1仪器和试药 　　仪器：高效液相色谱仪，电子天平，超声波脱气机，抽滤机。 　　试药：纯化水，色谱纯乙腈，分析纯的磷酸二氢铵和三乙胺。 　　罗红霉素对照品标示量94.7%，批号130557-201103，由中国食品药品检定研究院提供， 　　红霉素标准品批号：130307-200716，由中国药品生物制品检定所提供， 　　样品由上海现代哈森（商丘）药业有限公司提供，批13010102 　　2.2色谱条件 　　色谱柱：WelchromTMC18柱 （4.6×250mm Column 5-Micron） 　　流动相：0.067mol/L磷酸二氢铵溶液（用三乙胺调节PH值至6.5）-乙腈（65：35） 　　流速：1.0ml/min进样量：20ul检测波长：210nm柱温：室温 　　在此色谱条件下罗红霉素保留时间约为14分钟 　　2.3流动相配制 　　称取磷酸二氢铵10.02g，加水1300ml使其溶解，并用三乙胺调节PH值至6.5，最后加入730ml色谱纯乙腈，混匀，滤过即得。 　　2.4溶液的制备 　　2.4.1含量测定项下对照品溶液的制备：精密称取罗红霉素对照品25.mg置25ml量瓶中，加流动相适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 　　2.4.2含量测定项下供试品溶液的制备：取本品内容物，研细，精密称取适量（约相当于罗红霉素50mg）置50ml量瓶中，加流动相适量，超声助溶20分钟，并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。 　　2.4.3有关物质检查项下供试品溶液的制备：取本品内容物，研细，精密称取适量（约相当于罗红霉素100mg）置50 ml量瓶中，加流动相适量，超声助溶20分钟，并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。 　　2.4.4有关物质检查项下对照溶液的制备：精密量取2.4.3项下供试品溶液1ml置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。 　　2.5样品的鉴别 　　取罗红霉素胶囊样品3批，按“2.4.2”项下方法制备，照“2.2”项下的色谱条件在含量测定项下记录的色谱图中供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致，结果见表1 　　表1罗红霉素胶囊样品