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儿童急性再生障碍性贫血TNF-αIL-12变化 　　摘要：目的 为儿童急性再生障碍性贫血体内细胞因子浓度变化提供证据。方法 采再障组（42例）和对照组（40例）静脉血，用酶联免疫吸附法测定所取血样标本中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-12（IL-12）的含量。分析两组外周血中两种细胞因子是否存在显著性差异。结果 再障组患儿外周血TNF-α和IL-122的含量均高于对照组儿童。结论通过对TNF-α和INF-γ的监测，可以了解再障患儿疾病现状，治疗效果和预后情况。 　　关键词：再生障碍性贫血；肿瘤坏死因子-α；白细胞介素-12 　　急性再生障碍性贫血在病程中伴有内脏出血、重症感染，常危及生命，预后欠佳。但是现在大部分的病例被诊断为特发性免疫异常导致的再生障碍性[1]。细胞因子失调，包括肿瘤坏死因子（TNF-α）,白细胞介素-12（IL-12），研究发现在再生障碍性贫血的发病机制中起到了重要的作用[2]。儿童再生障碍性贫血已经成为继儿童白血病之后，儿童死亡率较高的一种血液系统疾病[3]。本次研究为了给临床上提供更好的关于儿童急性再障体内细胞因子浓度变化的证据。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 2010年6月~2013年6月， 42例再生障碍性贫血患儿，符合我国小儿再生障碍性贫血的诊断及分型标准[4]。患儿均为急性再生障碍性贫血发作。其中男20例，女42例，中位年龄6.4（3～14）岁。对照组选取我院体检中心正常儿童，共40例，男21例，女19例，中位年龄7.1（2～15）岁。两组儿童的年龄比较和性别比例上无显著性差异，P≥0.05。 　　1.2方法 　　1.2.1标本收集用肝素钠抗凝管采集患者和对照组儿童的静脉血5ml用于TNF-α,另5ml用于IL-12的测定。 　　1.2.2TNF-α含量的测定以鼠源性的抗TNF-α单抗以每孔400ng的量，在PH值为9的碳酸-碳酸钠缓冲液中包被96孔板中，置4℃环境过夜。取出后洗涤3次，加入预先备好的待测样本及标准的TNF-α(制作标准曲线用)。37℃孵育2h。用洗涤液洗涤3次，加入羊抗鼠TNF-α抗体，37℃孵育2h后，再洗涤3次，加入辣根过氧化物酶标记的兔抗羊IgG，37℃孵育2h后加入底物显色。终止显色后在自动酶标仪上测定浓度，并以标准曲线为基准求得TNF-α的含量。以Mean±SD ng/ml的形式表示结果。 　　1.2.3IL-12含量测定采用双抗体夹心ELISA 测定。每个样本全血以1000 r /min，离心10 min，吸取1mL 血浆置于－40°C 冰箱保存，集中测试，操作步骤参照ELISA 试剂盒说明书进行，基本步骤与测量干扰素的过程相同，结果由自动酶标仪测定，并以并以标准曲线为基准求得IL-12的含量。以Mean±SD ng/ml的形式表示结果。 　　1.3统计学方法应用SPSS1 12.0统计学软件进行统计学分析，计量资料采用均x±s表示，结果分析采用独立样本的t 检验，以P＜0.05 为差异有显著性。 　　2结果 　　2.1外周血TNF-α含量的对比结果再障组患儿外周血中TNF-α含量的平均值是：56.51±20.02 ng/ml，而对照组的患儿的平均值为（25.88±10.11） ng/ml。通过独立样本t检验分析，P=0.008＜0.05，差异具有显著性。 　　2.2外周血IL-12含量的对比结果通过独立样本t检验分析得到结果为，再障组患儿外周中的IL-12平均含量与对照组患儿外周血中的平均含量的差异具有显著性，P=0.012＜0.05。再障组患儿IL-12含量平均为：（32.54±16.06）pg/ml，对照组患儿外周血中IL-12含量平均为：（20.02±4.40）pg/ml。 　　3讨论 　　近年来，已经有不少学者从细胞因子水平方面研究再生障碍性贫血［5］。到目前为止虽然再生障碍性贫血精确的发病机制还没有被完全的阐明，但是大量证据表明Ｔ细胞介导的免疫调节异常在再障的发病机理中发挥了重要的作用。Th1功能失调被认为是再障发病的一个重要原因，Th1功能活跃导致TNF-α和INF-γ过表达成为了再障炎症改变的基础[6]。 　　肿瘤坏死因子，是单核-巨噬细胞分泌的单核细胞刺激因子，在炎症和免疫反应中起着重要的作用。人的TNF具有两种形式TNF-α和TNF-β。由于TNF-β又称为淋巴毒素只限于局限分泌，而TNF-α则被广泛分泌到外周血循环中。所以在关于机体免疫功能的研究中，一般都是检测TNF-α的含量。研究表明，再障患者体内TNF的含量有明显增加[7]。最初的研究认为，TNF是造血祖细胞的负调节因子，能够抑制粒红细胞集落形成单位、粒单细胞集落形成单位、红系爆式集落形成单位及红系集落形成单位的形成[8]。但后期证实，TNF对正常造血细胞具有双向调节