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谷氨酰胺对烧伤“休克心”保护作用研究 　　摘要 目的：探讨谷氨酰胺对烧伤大鼠“休克心” 的保护作用。方法：90 只Wiatar大鼠随机分为对照组（A）、烧伤组（B）、Gln治疗组（C）。B 组和C 组造成30% 总体表面积Ⅲ度烧伤。在伤后3、6、12、24小时，动态检测心肌细胞线粒体内细胞色素C、SOD、MDA及GSH-Px水平。结果： 烧伤组大鼠伤后心肌线粒体细胞色素C、SOD、GSH-Px有不同程度下降，谷氨酰胺对上述指标下降有较好拮抗作用。伤后心肌线粒体MDA含量显著升高，谷氨酰胺对MDA升高有较好拮抗作用。结论：谷氨酰胺对烧伤后心肌线粒体的损伤具有很好的保护作用。 　　关键词：谷氨酰胺;烧伤;休克心;心肌细胞;线粒体 　　诸多研究显示，严重烧伤早期即出现心肌器质性损害。由于烧伤早期出现的心肌缺血缺氧损害，不仅引起心功能不全还可以诱发或使烧伤休克加重，成为烧伤早期缺血缺氧的重要启动因素之一，因此黄跃生等于2000年提出了“休克心”这一概念[1]。鉴于此，临床上开展对烧伤后“休克心”的防治研究具有非常重要的理论与临床意义。 　　近年来有研究表明，谷氨酰胺（glutamine，Gln）在烧伤营养中的作用已远远超出了传统非必需氨基酸的范畴。当机体处于烧伤、创伤、感染等应激状态时，机体发生一系列的代谢变化，需要补充外源性谷氨酰胺。谷氨酰胺作为肠道粘膜细胞代谢所必需的营养物质，能够促进胃肠道细胞增殖，维持免疫细胞的正常功能，提高烧伤、创伤的治愈率并且降低病死率。[2]。本研究中，我们将重点观察Gln对烧伤后心肌细胞线粒体的影响，以进一步阐明Gln保护烧伤“休克心”，维护心脏正常功能的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 　　健康成年Wistar大鼠90只，雌雄不限，体质量（220±30）g，由南华大学实验动物学部提供。随机分成3组，正常对照组（A组，n=10）、烧伤对照组（B组，n=40）和Gln组（C组，n=40）。分别观察伤前（ A 组） ，以及伤后3、6、12、24h四个时相点 （ B 组、C 组） ，每个时相点10只大鼠。 　　1.2 烧伤模型的制备 　　A组不予烧伤，其他2组大鼠烧伤前禁食12h，1%戊巴比妥钠（30mg/kg）腹腔注射麻醉，背部电推剃毛，置于92℃水浴中烫伤18秒，造成30%体表面积Ⅲ度烧伤（病理切片证实）。伤后按40ml/kg腹腔注射乳酸林格氏液进行液体复苏，创面涂以碘伏抗感染，每天2次。Gln组大鼠采用灌胃方式给予Gln 1.0 g / （ kg? d）。烧伤对照组给予同等剂量的甘氨酸， 使各组大鼠等氮、等热量。伤后动物自由进食，自由饮水。 　　1.3 心肌线粒体的制备 　　断头处死大鼠， 摘取心脏， 心肌线粒体的提取采用组织线粒体分离试剂盒（美国Pierce公司），操作按照试剂盒说明书进行。将新鲜的心肌组织（约50～100mg）置于已预冷的玻璃匀浆器中， 用眼科剪将心脏反复剪碎，直至剪成肉泥; 再加入800ml线粒体分离试剂A，小心匀浆约20次，将匀浆液转移至Eppendorf管中，再加入800ml线粒体分离试剂C，700g，4℃条件下，离心10min。取上清液在3000g，4℃条件下，离心15min。取沉淀加入500ml线粒体分离试剂C，在12000g，4℃条件下，离心5min。第三次离心后的沉淀即为心肌组织的线粒体。 　　1.4 心肌线粒体细胞色素C的测定 　　取两个比色杯，分别加入线粒体悬液适量，0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4），10%去氧胆酸钠及10mmol/L K3Fe（CN） 6，测定杯中加入连二硫酸钠，记录波长540～630nm 处的氧化-还原光谱，取540～ 550nm 光谱差计算细胞色素C含量。 　　1.5 心肌线粒体SOD、 MDA和GSH-Px和含量测定 　　SOD活性测定采用黄嘌呤氧化酶法，MDA含量测定采用硫代巴比妥酸法，GSH-Px 活性测定采用二硫代二硝基苯甲酸比色法。具体操作方法按试剂盒说明书进行。 　　1.6 统计分析 　　数据用均数±标准差（用±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，所有数据采用SPSS 13.0统计软件分析。 　　2 结果 　　2.1 Gln对烧伤大鼠心肌线粒体细胞色素C水平的影响 　　与对照组比较，烧伤组心肌线粒体细胞色素C在伤后3、6、12及24 h均呈显著性降低，其中伤后12 h下降幅度最大，Gln治疗组心肌线粒体的细胞色素C在烧伤后3、6、12及24 h 均较烧伤组有明显升高，见表1。 　　表1 心肌细胞线粒体内细胞色素C水平（±s） 　　组别 　　伤后时间 　　t/h 　　细胞色素c水平 　　/μmo l? mg - 1PRO 　　对照组（A组） 　　0 　　0.53±0.04 　　烧伤组（B组）