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聚乳酸高分子材料生物安全性评价 　　【摘要】对可降解聚乳酸塑料进行生物学安全性评价，为食品包装材料的应用提供依据。参照原中华人民共和国卫生部《化学品毒性鉴定技术规范》中生物学评价的方法和要求，对聚乳酸塑料急性毒性、亚急性毒性试验，致突变毒性（Ames试验、小鼠淋巴瘤细胞突变试验及染色体畸变试验），遗传毒性（睾丸染色体畸变、小鼠精子畸形试验、胎鼠致畸）等系列生物安全性进行研究。结果表明该材料的生物学检测结果均为阴性，提示该材料具有良好的生物学安全性。 　　【关键词】生物降解塑料 聚乳酸高分子材料 生物安全评价 　　引言 　　随着环境问题的日益严重和绿色化学的兴起，生物降解材料的研究越来越引人注目。聚乳酸（polylactic acid，PLA）是一种热塑性脂肪族聚酯化学物，是由乳酸为原料直接缩聚，或者为提高材料性能在其中加入一定比例的交联剂偶联聚合后得到的高分子化合物。聚乳酸产品可以通过生物途径快速降解，如一些微生物或蛋白酶可以促进其降解，因此聚乳酸被认为是具有广泛应用前景的绿色塑料。近年来，成型加工工艺的改进可以有效地提高聚乳酸薄膜的结晶速率和结晶度，提高了聚乳酸薄膜的阻湿阻氧能力。 　　有研究表明，聚乳酸材料很好地生物相容性，可作为医疗用途。聚乳酸材料应用于食品包装的应用受到广泛的关注。食品包装材料的生物安全是食品安全的重要组成部分，生物安全性是生物可降解材料应用于食品包装用途的首要条件，聚乳酸高分子材料应用与食品包装用途的生物安全性还有待进一步的评价。本研究依据《化学品毒性鉴定技术规范》中生物学评价的要求对聚乳酸塑料进行了系统的生物安全性评价，包括急性毒性、亚急性毒性试验，致突变毒性，遗传毒性等，为聚乳酸塑料的食品包装用途提供生物安全性依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验材料 　　聚乳酸：分子量≥5万道尔顿 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 受试物处理 　　受试物处理：将聚乳酸粉末预粉碎后用10%碳酸二甲酯溶解后，加入同等体积的无水乙醇沉淀。过滤取滤渣分别过120目和200目筛待用。 　　1.2.2 致突变性毒性 　　（1）Ames试验。选用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株，采用平板掺入法进行试验。采用多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝匀浆，经生物活性鉴定合格后作为体外代谢活化系统。根据毒性测定结果，试验用样品共设8μg/皿、40μg/皿、200μg/皿、1000μg/皿、5000μg/皿5个剂量组，同时设阳性对照、溶剂对照（加入10%的吐温80替代样品溶液）、未处理对照。在顶层琼脂中加入0.1 ml试验菌株增菌液，0.1ml试验用样品溶液和0.5mlS-9混合液（当需要代谢活化时），混匀后倒入底层培养基平板上，每个剂量3个平皿。在37±1℃培养48h，计数每皿回变菌落数。试验用样品组回变茵落数超过自发回变的2倍以上；进行活化（加S-9）和非活化（不加S 9）试验，并具有剂量一反应关系时即判定为阳性。试验在相同条件下重复做两次。 　　（2）小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验。试验用样品设2.0g/kg、4.0g/kg体重3个剂量组。同时设溶剂对照（10%吐温80水溶液）和阳性对照（环磷酰胺40mg/kg体重，腹腔注射）。采用间隔24h次经口灌胃法给予聚乳酸。末次给试验用样品6h后，颈椎脱臼处死动物。取股骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Glemsa染色。双盲法阅片。在光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞（PCE），计算微核发生率。每只动物观察200个嗜多染红细胞，计数成熟红细胞（NCE），计算PCE/NCE比值。 　　（3）小鼠骨髓染色体畸变试验。试验用样品设1.0g/kg、2.0g/kg、4.0g/kg体重3个剂量组。同时设溶剂对照（10%吐温80水溶液）和阳性对照（环磷酰胺40mg/kg体重，腹腔注射）。采用间隔24h经口灌胃法给予聚乳酸，连续5天。末次给试验用样品6h后用颈椎脱臼法处死动物，于处死采集样品前4h腹腔注射4 0mg/kg秋水仙素。取出股骨，剔除肌肉等组织，制备骨髓细胞悬液，用姬姆萨染液染色，计数畸变细胞：对每只动物选择100个分散良好的中期分裂相，在显微镜油镜下进行读片。在读片时应记录每一观察细胞的染色体数目，对于畸变细胞还应记录显微镜视野的坐标位置及畸变类型。所得各组的染色体畸变率用x 2检验进行统计学处理，以评价试验组和对照组之间是否有显著差异。 　　1.2.3 小鼠急性毒性试验（最大耐受剂量法） 　　选用18g-22g健康昆明种小鼠20只，雌雄各半，进行试验。聚乳酸最大使用浓度0.5g/mL，灌胃容量为20mL/kg体重，即以10.0g/kg体重的剂量，2次灌胃，每次间隔6小时，连续观察14天，记录中毒状况和死亡情况，