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细胞有丝分裂实验综合改进 　　摘 要：“细胞有丝分裂”实验，是现行生物教科书中必做的实验之一。这个实验无论对培养基本生物技能，还是加深理解有丝分裂过程的掌握，都是非常重要的，但在实验过程中发现传统方法中有几点不足需要改进。针对实验的方法、步骤、选材等环节进行了综合改进。 　　关键词：有丝分裂；综合改进；选材；实验条件； 　　观察植物细胞的有丝分裂实验在生物学实验中占有重要地位，但实际操作中，成功率较低，在一个300高中生的样本中，仅有62位学生获得预期的实验效果。经过多年的调查观察，主要原因有：（1）解离、漂洗需要时间较长。（2）细胞染色太深，不易辨认染色体。（3）用拇指压片，细胞分散不好，重叠而难于分辨。（4）洋葱，往往处于休眠状态，发根少，或不发根，无法满足实验用。 　　为此，不同学者针对实验流程、实验对象以及实验环境进行了改进，一些学者根据实验的选材进行了分析和改进，提出了针对实验材料的改进方法，包括：实验样本培养和保存的方法。一些学生则针对实验的流程进行了改进，对制作装片、染色等实验环境进行了改进，在以上研究的基础上，对实验进行综合改进。包括实验样本的选择、样本的培养、实验流程的改进，在提高实验成功率的同时，提高实验效果。经过实验证明了该方法的有效性。 　　一、常见方法局限性分析 　　1.传统方法选用洋葱根尖做实验材料。首先，洋葱体积较大，1个广口瓶只能培养1个洋葱，在培养时需经常换水，如果人工进行实验，需要很多洋葱，无形中增加了工作量与实验成本；其次，洋葱根尖虽较粗壮，但细胞中染色体形态反而不明显；再次，传统方法中待根尖长5 cm时再取生长健壮的根尖制片也不妥，根尖只需长到约1 cm时反而更合适。 　　2.首先，传统方法使用质量分数为15%的盐酸与体积分数为95%的酒精1∶1的混合液对洋葱根尖进行解离，这样容易忽视酒精的固定作用，并且此解离液会引起原生质收缩。根尖的固定这一步骤是将根尖杀死，使根尖分生区的细胞固定在有丝分裂的不同时期，避免染色体在解离时状态的改变。根尖的解离是实验的关键步骤之一，解离可以除去细胞间的果胶，并使细胞壁纤维素软化，根尖解离是否合适，直接关系到染色的效果和压片时细胞能否分散。其次，传统方法中解离时间为3～5 min，实际操作时解离效果并不理想，建议时间改为8～10 min。 　　3.为了观察细胞中的染色体的形态变化，通常用碱性染料对呈酸性的染色体进行染色，传统方法中使用质量浓度为0.01 mol/mL的龙胆紫溶液染色3～5 min，但在实际使用时发现浓度偏高，整个细胞都呈紫色，而细胞核呈深紫色，不能直接区分细胞核中的染色体。 　　4.按传统方法中的步骤与方法不能使根尖细胞完全分散开来。 　　二、实验方法的综合改进 　　1.实验材料的优化对比。经过多年的观察发现，当室内温度在20℃左右时，经过两到三周的时间后茎盘会发生较大的变化：开始变得向外突出并且此时面积也会随之而增大、顶端长出茎叶。在这个温度下进行培养，平均每个可发根100条以上，效率提高并且也降低了实验成本。 　　培养器皿与培养基质传统方法中提到培养洋葱根采用广口瓶，这样的器皿并不十分合适。这是由于实验样本的特点确定的。洋葱底部与广口瓶瓶口吻合，从而会导致氧气不足而烂根。因此本文建议选用100 mL的烧杯，使洋葱底部与烧杯口的水接触，并经常换水，在20℃左右的室内，放置4～5天，在这样的环境下，洋葱的根部长到3 cm以上，就可以成为优秀的实验样本了。 　　传统方法用水作培养基质，但用水做基质细胞分裂较慢，相反如果改用培养液代替清水培养会收到更好的实验效果。可以将洋葱放在清水中培养3天，当根部成长1 cm以后，此时更换培养液，再经过2～3天的时间培养。这样操作的好处在于：（1）洋葱的根尖生长快，细胞分裂旺盛；（2）制片后通过实验很容易找到各期的分裂相。本文所提出的培养液的配方是Ca（NO3）2、KH2PO4、0.25 gMgSO4?7H2O、0.125 g KCl、0.125 g FeCl3的混合液体。其具体含量为：1000 mL清水、1.0 gCa（NO3）2 0.25 gKH2PO4、0.25 g MgSO4?7H2O、0.125 gKCl、0.125 gFeCl3。 　　2.实验流程优化对比分析。天中细胞分裂因时间的不同有快有慢，与上课时间不对应，一般由老师选择最佳时间将粗壮、雪白的根尖5 mm处剪下，用卡诺固定液（乙醇：冰醋酸二3∶1）固定后，保存于70%酒精溶液中，随时供实验人员实验用。教科书上介绍固定洋葱根尖时间为上午10时～下午2时为最佳时间。现将2014年3月用清水和培养液为基质的实验记录列表如表1 　　表1为在放大500X显微镜下寻找出分裂相细胞最多的一个实验作出统计所得的数据通过上表和多年的实践证明：笔者所用的洋葱品