猪弓形虫抗体检测试剂盒.docVIP

PAGE PAGE 3仅供科研使用，不得用于临床诊断。仅供科研使用，不得用于临床检验。猪弓形虫抗体定性检测试剂盒（ELISA）说明书【产品名称】通用名称：猪弓形虫抗体定性检测试剂盒（ELISA）英文名称：Test Kit for Antibodies to Porcine Toxoplasma Gondii ELISA KIT【包装规格】96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，弓形虫病是由刚第弓形虫（Toxoplasma gondii，TOX）引起的一种人畜共患寄生虫病，以发热、呼吸急促、嗜睡、后肢麻痹为主要特征。本试剂盒用于检测猪血清或血浆中弓形虫抗体，可用于评估猪场弓形虫感染状况。【检验原理】本试剂盒系由预包被弓形虫Sag1重组抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中弓形虫抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有弓形虫抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有弓形虫抗体。【主要组成成分】主要成分组分数量主要成分阴性对照1.0 ml×1--阳性对照1.0 ml×1--包被微孔板96T预包被固相抗体HRP标记抗体6mLHRP标记的检测抗体样本稀释液25mL--底物液A6mL过氧化脲工作液底物液B6mLTMB工作液终止液6ml2mol/L稀硫酸20×浓缩洗涤液30mL含0.15%Tween20的PBS说明书1份--自封袋1个--不干胶2片--需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪2、精密移液器及一次性吸头3、蒸馏水4、洗瓶或者自动洗板机5、37℃水浴锅或恒温箱6、500ml量筒7、无粉一次性乳胶手套【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。【适用仪器】 半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。【样本要求】 样本类型和采集以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。样本保存和稳定性样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在- 20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。【样品准备】1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。 【检验方法】1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。4.混匀，置37℃反应30分钟。5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。7.洗涤，同步骤5。8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值），无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.20，阳性对照≥0.5。【检验结果的解释】 1.C.O（临界值）=2.1×阴性对照均值（阴性对照均值小于0.1时按0.1计算）；2.样品值＞C.O为阳性，样品值≤C.O为阴性