细胞培养在口腔再生医学中的应用.pptVIP

干细胞（stem cell） 定义：干细胞是来自胚胎、胎儿或成人的具有持久或终身自我更新能力的细胞，它能产生特异的细胞类型，形成人体组织和器官。 * 细胞培养在口腔再生医学中的应用 应用细胞生物学和工程学的原理，研究、开发修复和改善损伤组织结构和功能的生物替代物 。 组织工程（Tissue Engineering）： J. Vacanti R. Langer 组织工程基本要素 种子细胞 生物支架材料 微环境（生长因子等） (Protein data bank) 组织工程的基本原理 种子细胞体外扩增，与生物材料按一定的比例混合，将细胞-材料复合物植入机体的组织或器官的病损部位，以达到修复创伤和重建功能的目的 常用的支架材料是合成的可生物降解的高分子聚合物如：聚乳酸（PLA）、聚乙醇酸（PGA）、聚乳酸和聚乙醇酸复合物（PLGA）等 口腔组织特有的干细胞 牙髓干细胞 牙周膜干细胞 脱落乳牙牙髓干细胞 根尖牙乳头干细胞 唾液腺干细胞 （/wiki/Stem_cell) 牙髓干细胞 比骨髓基质干细胞具有更强的增殖率、克隆形成率和倍增率 可被诱导分化为脂肪细胞、神经样细胞 Stroo-1和CD146等干细胞表面标记阳性 体内诱导可形成类似牙本质-牙髓复合体样的结构 脱落乳牙牙髓干细胞 比骨髓基质干细胞具有更强的增殖率、克隆形成率和倍增率 Stroo-1和CD146等干细胞表面标记阳性 可诱导分化为神经细胞、脂肪细胞和成牙本质细胞 体外可形成钙化结节 体内可在免疫缺陷小鼠皮下成骨和产生牙本质样物质 牙周膜干细胞 Stro-1和MUC18及腱特异性标记SCX表达阳性 可被诱导分化为牙髓母细胞、脂肪细胞、纤维母细胞、牙骨质细胞和成骨细胞 体外可形成矿化结节，表达碱性磷酸酶或骨唾液蛋白 体内试验牙周膜干细胞能产生沿牙周膜结缔组织方向走行的牙骨质样结构 再生医学技术在口腔医学中的应用 在颌面重建中的作用 在引导口腔组织再生中的作用 组织工程化黏膜在口腔医学中的应用 人造唾液腺 牙再生：组织工程方法---种子细胞+支架材料 发育生物学---模拟牙齿发育的过程 口腔生物学其他研究方法 基因芯片、蛋白芯片 和组织芯片 蛋白质组学 生物信息学 模式生物学 系统生物学 基因芯片技术 基因芯片技术，又称DNA微阵列技术，是将cDNA文库中已知和未知的全长序列或寡核苷酸序列固定于玻片上，同时检测比较生物样品中多个已知或未知序列的表达状况 基本原理与经典的核酸分子杂交方法一致 高效地大规模获取相关生物信息 基因芯片技术的主要技术流程 芯片的设计与制备 靶基因的标记 芯片杂交与杂交信号检测 A A A T C G C A A G C T T T A G G A A A T T C 基因芯片技术存在的问题 设备昂贵 探针有错误，有杂交背景，降低特异性 蛋白芯片技术 蛋白芯片是以蛋白质代替DNA作为检测对象，直接在蛋白水平上检测表达模式 蛋白芯片技术 主要技术流程 Chip membrane Hybridization Labeled protein sample Add Streptavidin Streptavidin Fluorescent labeling Streptavidin Ab Fluorescent detect 存在的问题 固定于载体上的蛋白质结构单一，无法反应蛋白质结构的多样性 固定于载体上的蛋白质的稳定性 造价比较昂贵 影响结果特异性的因素较多 组织芯片技术 组织芯片技术是基因芯片技术的发展和延伸 将大量临床组织标本排列在一张载体进行分析研究 最大限度地利用组织资源 所需样品少，高通量、多样本的分析工具 结果可靠，便于实验对照。 (/tissue-arrays/口腔Oral_Cavity/OR601) 蛋白质组（proteome） 定义：蛋白质组是特定的时间和特定的空一个完整的生物体（或细胞）所表达的全体蛋白质的特征。包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白质与蛋白质相互作用等，在蛋白质水平上获得对于有关生物体生理、病理等过程的全面认识。 蛋白质鉴定（Western杂交） 翻译后修饰 蛋白质功能确定 未磷酸化蛋白 磷酸化蛋白 蛋白质组学的研究内容 Actin 蛋白质组学研究方法 组成性蛋白质组学研究（compositional proteomics） 采用高通量的蛋白质组研究技术分析尽可能多乃至接近所有的蛋白质 比较蛋白质组学研究（comparative proteomics） 发现与重要生命过程或人类重大疾病相关的差异表达蛋白 蛋白质组研究中主要应用的技术： 双相电泳（2-DE） 质谱（MS）技术 数据库设置与检索系统等