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第六节 口腔肿瘤分子生物学 一、细胞增殖与细胞凋亡 （一）细胞增殖 （二） 细胞凋亡 二、口腔肿瘤发生的分子机制  （一） 癌基因 ???  （二） 抑癌基因 三、口腔肿瘤转移的分子机制 （一）口腔肿瘤细胞转移过程 （二）口腔肿瘤细胞转移的分子机制 四、口腔肿瘤相关基因的筛选与功能研究策略 一、细胞增殖与细胞凋亡 1. 细胞增殖是指通过细胞分裂增加细胞数量。 2. 细胞周期是指细胞完成一次有丝分裂的过程。 3. 真核细胞的细胞周期分为4个时期： DNA合成前期（G1期） DNA合成期（S期） DNA合成后期（G2期） 分裂期（M期） 休眠细胞暂时退出细胞周期，但在适当 的刺激下可重新进入细胞周期,称G0期细胞。 （一）细胞增殖 G1 S G2 M 细胞周期 G0 对细胞分裂增殖有调控作用的细胞生长因子。 周期蛋白（cyclin）和周期蛋白依赖性激酶（cyclin-dependent kinase，CDK）,这两种蛋白是细胞周期进展的主要推动力。 CDK抑制剂，负责负向调控CDK的活性。 细胞周期检查点调控蛋白，负责监控细胞遗传物质的忠实复制。 肿瘤是失去调控的非正常细胞增殖。 4. 细胞周期的调控 细胞凋亡是一种程序性细胞死亡，是一种主动的细胞死亡。 细胞凋亡的过程受到了严格的调控，细胞凋亡的缺陷可以导致细胞的过度增生。 细胞凋亡主要途径： 线粒体/细胞色素C途径。 通过TNF受体家族激活Caspase-8。 （二） 细胞凋亡 二、口腔肿瘤发生的分子机制 （一）癌基因 原癌基因：是正常基因，同时也是细胞生长必不可少的关键基因 癌基因：在癌症中，原癌基因发生突变或表达水平过度增加后就会形成能够致瘤的癌基因。 （二）抑癌基因 抑癌基因编码的蛋白产物抑制细胞生长或引起细胞死亡。 抑癌基因的突变或表达缺失可以导致其抑制细胞生长功能丧失，有利于癌症的发生。 原癌基因和抑癌基因的关系及在肿瘤发生发展中的作用 原癌基因 + 抑癌基因 - 癌基因 +++ 抑癌基因失活 X 肿瘤细胞 正常细胞 生长 生长 三、口腔肿瘤转移的分子机制 （一）口腔肿瘤细胞转移过程 肿瘤细胞侵入局部组织基质 肿瘤细胞进入脉管系统，包括血液循环和淋巴系统。 肿瘤细胞在远处脉管黏附和形成癌栓。 肿瘤细胞出脉管并在继发组织器官定位生长，形成转移病灶 转移病灶继续扩散，形成新的转移病灶 口腔肿瘤细胞转移过程 （二）口腔肿瘤细胞转移的分子机制 诱导新的血管形成 肿瘤细胞黏附能力的变化 细胞外基质的破坏和细胞运动 逃避免疫监视 四、口腔肿瘤相关基因的筛选与功能研究策略 遗传学方法 抑制消减杂交技术 基因芯片技术 激光显微切割技术 小鼠体内的逆转录插入性突变 口腔肿瘤相关基因功能研究策略 构建和表达突变基因 基因敲除或沉默 抑制消减杂交技术 是一种鉴定、分离两种组织细胞中差异表达基因的技术，有商业试剂盒。 Diatchenko 等1996年在抑制性PCR的基础上建立起来的cDNA消减杂交方法。 优点：与差异显示PCR相比假阳性率低；与代表性差异分析法RDA相比效率高，减少了杂交轮次；敏感性高。 缺点：需要较多的样本（需数微克mRNA）；不能同时进行数个样品之间的比较。 电泳结果 差异表达基因 有关技术简介 激光显微切割技术 激光显微切割技术是由美国国立癌症研究所发展的一种在显微镜下用激光进行微切割采样的方法。 优点：可以快速精确地从组织切片上将所要研究的形态或表型相同的细胞从组织中分离出来，获得纯的细胞群；革命性地克服了普通机械方式分离组织的细胞异质性问题 有关技术简介 * * * *