分子生物学--第三章-DNA的复制和修复.pptVIP

掌握内容 DNA复制的特点 半保留复制 半不连续复制 复制叉 冈崎片断 基因突变的类型 * ？ Reolication ＆ Repair of DNA 第三章 DNA的复制和修复 核酸代谢 一、 DNA复制的概念 DNA复制：在细胞分裂过程中，以亲代DNA为模板合成子代DNA分子的过程称为DNA复制（DNA replication）。 双螺旋的每一条DNA链都可以作为模板合成一条与其互补的DNA链，从而形成两条与其完全相同的子链。 第一节 复制 （二）、DNA的复制方式——半保留复制 当DNA复制时，DNA解螺旋，双链彼此分开，均可作为模板； 碱基互补配对原则组成两条新的多核苷酸链，一个DNA分子复制成两个同样的DNA分子。 其中一股单链是从亲代完整地接受。 另一股单链完全重新合成，且按碱基配对原则互补。 意义：保持DNA在代谢上的稳定性 （三） DNA 的半不连续复制 日本，冈崎（1968） 1、概念 DNA、RNA：合成方向5‘→3‘ 一条链合成方向与复制叉同向，按5‘→3‘方向连续复制——前导链 冈崎片段：模板DNA中5‘→3‘走向的单链，在复制过程中，DNA聚合酶随着复制叉的打开，一小段一小段地合成新链，这条新链被称为随从链，随从链的复制有多个起始点，每个起始点按5‘→3‘方向合成一小段DNA，这些小片段称为冈崎片段。 （四）DNA复制的酶系 1、解旋解链酶： 1）拓扑异构酶（Topo，解超螺旋酶）：解开DNA超螺旋 2）解链酶（解螺旋酶）：解开碱基间氢键，形成2股单链 3）单链DNA结合蛋白（SSB）：结合单股DNA，阻止DNA复性 Topo Ⅰ： 切开DNA中的一条链，与另一 条链解缠绕或再缠绕→连接 Topo Ⅱ 同时切开DNA双链 解旋或再螺旋→连接 解链酶、SSB的作用 解链酶（helicase，解螺旋酶）： 断裂互补碱基间的氢键，使DNA双链分离形成“复制叉” 单链DNA结合蛋白（SSB）： 结合于解开的DNA单链，防止双螺旋再形成（阻止DNA复性） 子链的合成必须有5’端核苷酸引物存在 引物由引物酶催化合成，引物酶——特殊的RNA聚合酶 引物：小段RNA，在此基础上，DNA聚合酶延长子链 2、引物酶：合成小段RNA引物，用于DNA聚合酶延长子链 3、DNA聚合酶（DNA polymerase） ：延长子链 DNA聚合酶不能从头合成子链，只能延长 DNA聚合酶：多种类、多种活性 1）DNA聚合反应条件 （1）底物 dNTP（dATP，dGTP，dCTP，dTTP） （2）聚合酶 （3）模板　单链的DNA母链 （4）引物　寡核苷酸引物（RNA) （5）其他：解链酶，解旋酶，单链结合蛋白，连接酶 2）DNA聚合酶（DNA polymerase）分类 大肠杆菌DNA聚合酶 I、Ⅱ、Ⅲ DNA聚合酶I：多功能酶 1）沿5’→3’方向延长DNA链（DNA聚合酶活性） 2）由3’端水解DNA链（3’ → 5’核酸外切酶活性） 3）由5’端水解DNA链（5’ → 3’核酸外切酶活性）等 ——常用的工具酶 复制准确性的保证： 复制过程中碱基的配对受到双重核对 1）DNA聚合酶的选择作用 2）3’ → 5’ 外切酶的校正作用。 DNA聚合酶Ⅱ： 不详 DNA聚合酶Ⅲ： 5’→3’方向延长DNA链 真正起复制作用的酶，对温度敏感 4、DNA连接酶：填补缺口、连接冈崎片段 DNA复制酶系 （五） DNA复制的过程 1、复制的起始： 1）DNA解旋、解链，形成复制叉：拓扑异构酶、解链酶、SSB 2）RNA引物合成： 依赖于单链模板，引物酶催化合成小段RNA引物 特点： 原核：环形DNA，一个起点，双向复制 真核：线形DNA，多个起点，多复制叉 2、复制的延长： 1）子链延长： 引物合成后，polⅢ（真核为Polδ或α）催化 在引物3’-OH末端添加与模板链对应互补的dNTP 2）半不连续合成： （1）领头链：链的延长方向与解链方向相同 连续合成（Polδ） （2）随从链：链的延长方向与解链方向相反 不连续合成（冈崎片段）（Polα） 3、复制的终止 1）水解引物及填补空隙： 冈崎片段合成后，polⅠ（真核可能是δ）水解去除RNA，填补留下的空隙 2）连接酶连接冈崎片段形成完整双链DNA： 空隙填补后，DNA片段间缺口由连接酶催化连接 产生完整的双链DNA分子 第二节 DNA的损伤、突变与修复 （一）DNA的损伤 某些理化因子（紫外线、电离辐射和化学诱变剂等）作用于DNA，造成其结构和功能的破坏，从而引起生物突变和致死的效应——DNA的损伤 DNA分子的损伤类型 1）碱