儿童细菌性腹泻大肠菌群的的分离及遗传特性研究课件.pptVIP

儿童细菌性腹泻大肠菌群的分离及遗传特性研究;一、 总述; 急性细菌感染性腹泻病是儿童的常见病、多发病,也是造成婴幼儿营养不良、生长发育障碍的主要原因之一。常见腹泻致病菌有志贺菌、侵袭性大肠杆菌、沙门氏菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌等。 不同区域,不同季节,不同年代,不同年龄,不同风俗习惯等,其大肠埃希氏菌的分布,类别,流行性,致病性等均有很大不同 ;总述;材料与方法;材料与方法;结果;3.大肠菌群的16SrDNA PCR-RFLP; ;16SrDNA-RFLP酶切;16S rDNA序列系统发育树;16S rDNA系统发育; ;分析与讨论; 31个样品在EMB上的检出率仅为29%,有22个样品 未检测出菌株,而临床31个样品均表现为腹泻现象。其中可能的原因有:导致腹泻的细菌性致病菌不一定全部可在现有实验条件下培养；部分可培养菌在样品中受损或被破坏,不能在培养上生长；非细菌性腹泻菌引起的腹泻如病毒类,在本实验条件下亦不能检测。 ;本实验表明该地区儿童大肠杆菌群有10个类群。其中以大肠埃希氏菌为主，其比率超过50%，其次是克雷白氏杆菌比率为21.6%，弗氏柠檬酸杆菌占有率8.1%，其他菌占有率18.9%。表明该地区大肠杆菌群多样性非常丰富。;本研究中，引起腹泻的病原细菌多，如条件致病菌弗氏柠檬酸杆菌，克雷白氏杆菌，大肠埃希菌，费格森埃希菌等。值得注意的是，4-2，21-3与E. coli O157同源性分别达99.6%，99.9%，说明在雅安导致小儿腹泻的病原细菌中，有E. coli O157存在，由于E.coli O157会导致人严重的腹泻甚至还有死亡病例，因此必须重视该地区儿童细菌性腹泻情况。同时应及时追踪检测，以防止大面积爆发儿童腹泻病例。;5%乳糖发酵中，样品4所分离到的4个菌株均只产酸不产气，而其余33个菌株均既产酸又产气。按传统检验法该4个菌株应该判为非大肠埃希氏菌，在后续实验，其甲基红实验为阳性，枸橼酸盐利用实验为阴性，符合大肠埃希氏菌生化特征。其表型可能和遗传型之间存在差异。16S rDNA-RFLP和16S rDNA序列表明：该菌株在16Sr DNA-RFLP中最大的那个遗传群，序列与E.coli O157:H7的相似性竟达99.6%，至于为何其在5%乳糖发酵管中只产酸不产气，其原因还不清楚。; 4-2 产酸??产气的可能的代谢原因 ; ;检测出了克雷白氏杆菌,条件致病菌弗氏柠檬酸杆菌,故对该地区的儿童细菌性腹泻应加紧防控,综合治疗。防治大肠埃希氏菌时兼顾这些条件致病菌,药物选择能普遍治疗这些致病菌的。 ;EMB分离结果;EMB分离结果;EMB分离结果;EMB分离结果;5%乳糖发酵试验; 5%乳糖发酵试验;5%乳糖发酵试验;甲基红试验;甲基红试验;甲基红试验;枸橼酸盐利用试验;枸橼酸盐利用试验;DNA检测;16SrDNA扩增产物;MSP酶切;THANK YOU !