霉酚酸对im-9b淋巴细胞产生iggigm抗体的影响-effect of mycophenolic acid on igg igm antibody production by im - 9b lymphocytes.docxVIP

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霉酚酸对im-9b淋巴细胞产生iggigm抗体的影响-effect of mycophenolic acid on igg igm antibody production by im - 9b lymphocytes

霉酚酸对IM-9B淋巴细胞产生IgG、IgM抗体的影响论文作者签名:指导教师签名:论文评阅人1:评阅人2:评阅人3:答辩委员会主席:委员1:委员2:委员3:委员4:委员5:委员6:答辩日期:2015年05月23日南华大学学位论文原创性声明本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名:年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读硕(博/硕)士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有,本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文;学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》,并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文,解密后适用该授权。作者签名:导师签名:年月日年月霉酚酸对IM-9B淋巴细胞产生IgG/IgM抗体的影响摘要目的观察B细胞转化为浆细胞后,不同浓度的MPA对浆细胞存活及抗体产生的影响,为临床使用MMF抑制血型抗体反弹提供的实验依据。方法①CCK8法观察MPA对B淋巴细胞的增殖抑制作用。设置0.03、0.3、3、30umol/L四个MPA浓度组及DMSO溶媒对照组、空白对照组,通过酶标仪测定药物分别作用24h、36h、48h后的OD值,绘制出抑制率与MPA浓度和作用时间关系图;②选定最适MPA浓度,分别作用于B淋巴细胞后,显微镜下观察各组细胞的变化;③ELISA法检测MPA对B淋巴细胞抗体产生的抑制效果。将相同浓度的细胞接种于6孔板上,待细胞浓度达到106后,使用PWN刺激B细胞3-5天待其转化为浆细胞后,分别向各孔加入不同浓度MPA,及硼替佐米,4-6天后离心收集细胞上清液,ELISA法检测各组细胞IgM、IgG表达量。④流式细胞术检测浆细胞的转化率。将相同浓度的细胞接种于6孔板上,待细胞浓度达到106后,使用PWN刺激B细胞3-5天转化为浆细胞后,分别向各孔加入不同浓度MPA,及硼替佐米,作用4-6天后流式细胞术法检测处理后各组细胞CD19(-)CD38(+)浆细胞的百分率;⑤PCR法检测MPA对B淋巴细胞活化为浆细胞的影响。将相同浓度的细胞接种于6孔板上,待细胞浓度达到106后,使用PWN刺激B细胞3天转化为浆细胞后,分别向各孔加入不同浓度MPA,及硼替佐米,作用4-6天后,PCR法检测各组细胞内IMPDH2的表达情况;I结果①MPA对B细胞增殖有抑制作用,0.03umol/L的MPA抑制不明显,30umol/L,随着药物浓度增大,B细胞存活率从81.7%(0.3umol/L)下降到61.2%(30umol/L),随着时间增加0.3umol/LMPA组存活率从81.7%(24h)下降到64.15%(48h),30umol/LMPA组存活率从61.2%(24h)下降到38.79%(48h);②MPA抑制浆细胞的IMPDH2表达;当MPA浓度达到30umol/L时,IMPDH2表达明显减少,而0.3-3umol/L与对照组对比不明显,硼替佐米组几乎为0;③MPA可以降低CD19(-)CD38(+)浆细胞的存活率,0.3umol/LMPA组存活率为14.5%,而30umol/LMPA组存活率下降到8.2%;④IgG抗体产生随时间变化与对照组比较,0.3umol-30umol/L(第四天)MPA组由396.9ug/mL减少到289.1ug/mL,较对照组494.1ug/mL明显减少,0.3umol-30umol/L(第六天)MPA组由986ug/mL减少到460ug/mL,较对照组2205ug/mL明显减少,而低浓度MPA对IgM产生影响不大,0.3umol/L(第四天)MPA组254.6ng/mL较对照组255.8ng/mL无统计学意义,而3umol/L与30umol/L较对照组减少,由210.3ng/mL减少至190.7ng/mL,硼替佐米组122.7ng/mL较对照组明显减少,第六天随着MPA浓度增加,IgM产生量减少,具有统计学意义。结论①MPA可以抑制B淋巴细胞的活化和B淋巴细胞向浆细胞的转化;

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