慢病毒介导period2低表达促进x线照射胶质瘤u343细胞凋亡的分子机制研究-molecular mechanism of lentivirus-mediated low expression of period 2 promoting apoptosis of glioma u343 cells exposed to x - rays.docxVIP

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2018-07-27 发布于上海
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慢病毒介导period2低表达促进x线照射胶质瘤u343细胞凋亡的分子机制研究-molecular mechanism of lentivirus-mediated low expression of period 2 promoting apoptosis of glioma u343 cells exposed to x - rays.docx

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慢病毒介导period2低表达促进x线照射胶质瘤u343细胞凋亡的分子机制研究-molecular mechanism of lentivirus-mediated low expression of period 2 promoting apoptosis of glioma u343 cells exposed to x - rays

宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日慢病毒介导Period2低表达促进X线照射胶质瘤U343细胞凋亡的分子机制研究摘要目的体外研究生物钟基因Period2（Per2）的低表达对X线照射引起的胶质瘤细胞凋亡的影响及其分子机制。方法构建并合成Per2-shRNA、Control-shRNA（NC）慢病毒，将其感染p53野生型人胶质瘤U343细胞，应用嘌呤霉素筛选Per2低表达的shRNA-Per2细胞组及Control对照细胞组；给予6mV100cGyX线照射两组实验细胞，并分别于1h、12h、24h后，应用单细胞凝胶电泳技术检测两组U343细胞DNA的损伤情况、应用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测实验组细胞的凋亡情况，并应用RT-qPCR及WesternBlot技术检测X线照射后两组U343细胞中与DNA损伤修复、细胞凋亡相关的基因ATM、p53以及c-myc等的表达情况。结果Per2-shRNA慢病毒明显下调生物钟基因Per2在人胶质瘤U343细胞中的表达；给予X线照射后，与Control细胞组相比，Per2低表达的shRNA-Per2细胞组DNA损伤更为严重，细胞凋亡率明显增加，且在X线照射后的1h、12h、24h，随着时间变化，shRNA-Per2细胞组的DNA损伤和细胞凋亡呈现出递增的趋势；此外，随Per2蛋白表达量的下调，ATM和p53的表达水平也明显减少，而c-myc的表达水平显著增加。结论下调生物钟基因Per2的表达可以增加人胶质瘤U343细胞对X线的敏感性；且Per2作为上游基因，通过调控ATM、p53、c-myc等的表达，减弱了它们在ATM-p53通路中对损伤DNA的修复作用，进一步促进了胶质瘤细胞U343的凋亡；这一研究也为后期临床靶向基因治疗胶质瘤打下了理论基础。关键词Per2，U343，shRNA慢病毒，DNA损伤，凋亡MolecularmechanismsofdownregulationPeriod2bylentivirusenhanceapoptosisofgliomaU343cellirradiatedwithX-rayABSTRACTObjectiveToinvestigatedthemechanismbywhichdownregulatedexpressionofclockgenesPerod2(Per2)promotesapoptosisofgliomacellsexposedtoX-rays.MethodBuildandsyntheticthePer2-shRNA,Control-shRNA(NC)lentivirus,whichinfectedp53wild-typehumanU343gliomacellstogaintheshRNA-Per2cellgroupwithalowexpressionofPer2andControlcellsbyselectingwithpuromycin.TwogroupsofU343cellswereirradiatedwith6mV100cGyX-rayirradiation,andthenanalyzedthedamageofDNAandcellsapoptosisbyseveralmethods,suchasSCGEanalysis,AnnexinV-FITC/PIflowcytometry,andthisstudyalsousetheRT-PCRandWesternBlottodetecttheexpressionofgenesATM,p53andc-mycwhichrelatedtoDNArepairandcellsapoptosis.ResultsPer2-shRNAlentiviruscouldsignificantlyreducedtheexpressionofclockg