慢病毒介导rnai抑制wwtr1基因表达对结肠癌rko细胞生物活性的影响-effect of slow virus-mediated rnai inhibition of wwt r1 gene expression on biological activity of colon cancer rko cells.docx

万方数据 万方数据 本课题受以下基金资助： 福建医科大学附属协和医院院重点学科(普通外科)专项基金 国家自然基金（项目编号 2 目 录 中文摘要…………………………..…………………….….…………………………………………..…….. 5 英文摘要…………………………..………………………..…………………………………………………. 8 缩略词表…………………………………………………….……………… 13 正文 前言…………………………..……………………………………...…………………………… 16 参考文献…………………..……………………………..………………………………………………… 21 第一部分 WWTR1-siRNA 设计、合成及转染目的细胞 材料…………………..…………………..………………………………………………………….…… 25 实验方法…………………..…………………..…………………………….………………………… 28 结果…………………..……………………………..……………………………………………………. 44 讨论…………………..………………..…………………………………………………………………. 50 结论…………………..…………………..………………………………………………………………. 55 参考文献…………………..……………………………..……………………………………………. 56 第二部分抑制 WWTR1 表达对人结肠癌 RKO 细胞增殖的影响 材料………….…………………..…………………..…………………………………………………… 59 实验方法…………………..…………………..…………………………….………………………… 61 结果…………………..……………………………..……………………………………………………. 67 讨论…………………..………………..…………………………………………………………………. 73 结论…………………..…………………..………………………………………………………………. 78 参考文献…………………..……………………………..……………………………………………. 79 第三部分下游基因 mRNA 表达水平检测及相关机制分析 材料………….…………………..…………………..…………………………………………………… 81 实验方法…………………..…………………..…………………………….………………………… 82 结果…………………..……………………………..……………………………………………………. 85 讨论…………………..………………..…………………………………………………………………. 88 结论…………………..…………………..……………………………………………………………..…. 99 参考文献…………………..……………………………..……………………………………………. 100 3 在读期间已（待）发表的论文.………………..………………………………………………… 110 致谢……..…………………..……………………………..………………………………………………… 111 论文综述 结直肠癌分子靶点治疗的研究进展……………………….…………………….…….… 112 参考文献……...……………………………………………… 123 4 慢病毒介导 RNAi 抑制 WWTR1 基因表达对结肠癌 RKO 细胞生物活性的影响 摘要 结肠癌是最为常见的恶性疾病之一。尽管近年来结肠癌诊治取得了较快的发 展，但目前治疗效果仍难让人满意，手术后或化疗后的患者仍有近半数出现肿瘤 复发或者转移。因此寻找新的治疗靶点及方法对于提高结肠癌的治疗效果极为重 要。而寻找新型功能分子，并研究其作用机制和干预策略就具有重要的意义。 含有 WW 结 构 域 的 转 录 调 节 子 1 (WW-domain containing transcription regulator 1,WWTR1)又叫做 TAZ（Transcriptional co-activator with PDZ binding motif)，在哺乳动物的组织发生、发育中发挥重要的作用。WWTR1 还被发现可 以和转录因子 PPAR-γ, Runx2 和 Smad 结合参与调控干细胞的分化及再生。最近， 在乳腺癌及肺癌中均发现高表达的 WWTR1。过表达的 WWTR1 在乳腺癌细胞中 可以促进肿瘤的转移及侵袭，而抑制 WWTR1 的表达则明显降低了乳腺肿瘤细 胞的成瘤率，这一发现提示 WWTR1 是一个新的癌基因，并在乳腺癌的发生中 具有