脓毒症大鼠jakstat信号通路活化及其与高迁移率族蛋白b1表达的关系-activation of jak stat signaling pathway and its relationship with expression of high mobility group protein b1 in septic rats.docxVIP

6 6 脓毒症大鼠 JAK/STAT 信号通路活化及其与 高迁移率族蛋白 B1 表达的关系 摘 要 目的 本实验采用大鼠 CLP 模型动态观察脓毒症动物主要脏器 JAK/STAT 信号通 路的活化情况及对 HMGB1 mRNA 表达的影响 初步探讨 G 菌脓毒症时 HMGB1 诱 生的信号调控机制 阐明 JAK/STAT 信号通路与 HMGB1 表达的相互关系及其在脓毒 症所致多器官功能损害发病过程中的作用 旨在为进一步探索脓毒症的信号转导机制 和防治途径提供新的思路 方法 雄性 Wistar 大鼠 140 只 随机分为 8 组 (1) 正常对照组(n=10) 动物于 麻醉后活杀 (2) 假手术对照组(n=10) 动物于开关腹腔手术后 2h 活杀 (3)盲肠结扎 穿孔组 (n=60) 按时间点分别于 CLP 后 0.5 2 6 12 24 和 48h 活杀动物 (4) AG490 (JAK2 激酶抑制剂)组(n=24) CLP 前 20mins 皮下注射 AG490 8.0 mg/kg 然后于 CLP 后 2 6 24 和 48h 活杀 (5) RPM(rapamycin STAT 抑制剂)组(n=24) CLP 前 20mins 皮下注射注射 RPM 0.4 mg /kg 并于 CLP 后 2 6 24 和 48h 活杀 (6) DMSO(二甲基 亚砜 试剂的溶质)组(n=12) 开关腹腔手术前 20mins 皮下注射 DMSO 4.0 ml/kg 于 开关腹腔术后 2 和 24h 活杀 经腹主动脉采血 分离血标本用于测定血清生化指标 无菌留取动物肝 肺 肾 肠组织进行 STAT1 STAT3 活化分析以及 HMGB1mRNA 表达的检测 STAT 活化检测采用凝胶电泳阻滞分析试验 组织 HMGB1mRNA 表达采 用半定量 RT-PCR 方法检测 血清 ALT AST BUN Cr 等使用 7170 自动生化分析 仪测定 肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性采用酶学分光光度法测定 小肠组织二胺氧 化酶(DAO)活性采用分光光度法测定 结果 1. CLP 大鼠 STAT1 STAT3 活化规律及 AG490 RPM 预处理对 CLP 大鼠 STAT1 STAT3 的影响 正常肝 肺 肠 肾组织中 STAT1 和 STAT3 几乎未见或仅 有微弱活化 假手术组和 DMSO 组各组织 STAT1 和 STAT3 只有较弱的活化 但与正 常对照组相比差别不明显 肝 肺 肠 肾组织中 STAT1 在脓毒症早期即开始活化 CLP 后 6~24h 活化达到高峰 肝 肺组织中的 STAT3 的活化特点与 STAT1 相似 但 相对较弱 而在肾 肠组织中未观察到 STAT3 的活化 AG490 和 RPM 对肝 肺 肠 组织中 6h 24h 48h 等时间点 STAT1 STAT3 活化均有不同程度的抑制作用 AG490 对 48h 肾组织 STAT1 活化具有一定抑制效应 2. CLP 大鼠肝 肺 肠 肾组织 HMGB1 PAGE PAGE 7 mRNA 表达的动力学特点 正常对照组大鼠肝 肺 肠 肾组织中均有一定量的 HMGB1 mRNA 表达 假手术后 2h 表达无明显改变 肝组织 CLP 后 6h 表达明显上调 至 48h 仍持续在较高水平 CLP 后肺组织 HMGB1 mRNA 表达迅速增强 2h 达峰值 48h 则 降至正常对照水平 肠组织 HMGB1 mRNA 在早期无明显变化 一直到 48h 才显著升 高 肾组织 HMGB1 mRNA 表达动力学特点与上述三种组织不同 整个实验观察过程 中 HMGB1 mRNA 表达改变不明显 AG490 预处理对 CLP 大鼠组织 HMGB1 mRNA 表达的影响 与脓毒症组相应时间点相比 AG490 处理后肝组织在 24h 48h HMGB1 mRNA 表达显著降低 肺组织 HMGB1 mRNA 水平仅在 2h 时间点表现为明显下降 肠组织 HMGB1 mRNA 表达早期无明显变化 24h 48h 显著下调 AG490 处理对肾 组织无影响 iRPM 预处理对组织 HMGB1 mRNA 表达的影响 与脓毒症组相应时间 点相比 RPM 处理后肝组织在 6h 24h HMGB1 mRNA 表达显著降低 肺组织 HMGB1 mRNA 水平在 2h 6h 24h 48h 均表现为明显下降 肠组织 HMGB1 mRNA 水平早 期影响不大 CLP 后 24h 48h 则显著降低 RPM 处理对肾组织无影响 3. CLP 大鼠 肝 肾功能生化指标的变化特点 血清 ALT 在 CLP 后 24h 显著高于正常对照组