沙利度胺通过降低磷酸化c-jun氨基末端激酶及α-平滑肌肌动蛋白表达减轻博莱霉素所致大鼠肺纤维化-thalidomide reduces bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats by decreasing the expression of phosphorylated c - jun amino-terminal kinase and α -smooth muscle actin.docxVIP

摘要研究背景：肺纤维化是一种发病机制不明，累及肺泡、肺间质和(或)细支气管的弥漫性疾病，呈进行性发展，是很多肺部疾病发展的最终结局。其病理特征是大量成纤维细胞的活化聚集和细胞外基质的沉积。肺纤维化的发病率呈上升趋势，因缺乏有效的治疗手段，5年死亡率超过50%。为了提高肺纤维化患者的生存率及生活质量，人们对其发病机制及治疗方法的研究越来越多。近年来，沙利度胺作为一种有效的双向免疫调节剂在骨髓纤维化、肝纤维化、肾纤维化及肺纤维化疾病的治疗中发挥作用，有研究证实其可通过抑制多种参与纤维化过程中的炎症因子，如肿瘤坏死因子α（TNF-α），转化生长因子β1（TGF-β1），炎症细胞的核因子NF-κB等，起到一定的抗炎及免疫调节作用。信号通路在肺纤维化发病机制中的研究是近年来的热点，其中丝裂原活化蛋白激酶家族中的c-jun氨基末端激酶（JNK）介导的信号通路备受关注。已有研究证实其参与了肺纤维化的发生与发展。TGF-β1作为重要的致纤维化因子，能够磷酸化c-jun氨基末端激酶使其活化发挥作用。但是关于沙利度胺是否能通过降低TGF-β1，继而抑制JNK信号通路在肺纤维化中发挥作用未见报道。我们使用沙利度胺干预博莱霉素所致大鼠肺纤维化模型，来研究其可能作用机制。目的：观察沙利度胺在大鼠肺纤维化中的作用及对磷酸化c-jun氨基末端激酶及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响，进一步分析沙利度胺在治疗肺纤维化过程中可能的机制。方法：将90只健康雄性Wistar大鼠（200g±20g）随机分为对照组（N组）、模型组(M组)、沙利度胺组（T组）、SP600125组（SP组）、SP600125+沙利度胺组（SP+T组），每组各18只，于气管内滴注博莱霉素注射液（按5mg/Kg溶于0.9%生理盐水中至0.3ml）制备肺纤维化的模型，N组给予气管内滴注0.9%生理盐水0.3ml；SP组和SP+T组于造模当日给予SP600125（按15mg/Kg溶于DMSO液中至0.3ml）腹腔内注射，其余三组给予DMSO液0.3ml腹腔内注射，一次性给药；T组，SP+T组于造模当日起给予沙利度胺片（按100mg/Kg溶于0.9%生理盐水中至3ml）灌胃，其余三组给予0.9%生理盐水3ml灌胃，一日一次。各组分别于第7、14、28天随机选取6只大鼠，腹主动脉放血处死，留取肺组织，石蜡包埋切片，行苏木素-伊红（HE）染色和Masson染色，光镜下观察大鼠肺组织的结构、炎症及纤维化等病理学的变化；碱水解法测大鼠肺组织中羟脯氨酸（Hyp）的含量，免疫组化法及Westernblotting检测大鼠肺组织中p-JNK蛋白及α-SMA的表达情况。结果：1、M组于第7天时出现明显的肺泡炎症性改变，第14天时肺泡的炎症程度有所减轻，出现纤维化样改变，第28天时形成明显的纤维化样改变。SP组、T组、SP+T组三组较M组比较，肺纤维化的程度均有所减轻，以SP+T组减轻更为明显。2、N组羟脯氨酸的含量各时间点无明显差异，其余4组随着时间的延长羟脯氨酸的含量逐渐升高，于第28天时达高峰，第14、28天时M组、SP组、T组、SP+T组较N组明显升高（P＜0.05），SP组、T组、SP+T组较M组含量低，差异有统计学意义（P＜0.05）；第28天时SP+T组较SP组、T组含量低，差异有统计学意义（P＜0.05）。3、免疫组化结果：M组各时间点p-JNK蛋白与α-SMA较N组均表达增加，以第14天时最明显（P＜0.05）。与M组相比较，SP组、T组、SP+T组p-JNK蛋白与α-SMA表达均有所下降，以14天时最为明显（P＜0.05）；第14、28天时SP+T组α-SMA表达较SP组、T组两组降低（P＜0.05）；第14、28天时T组较SP组、SP+T组两组比较p-JNK蛋白表达高（P＜0.05）。4、Westernblotting结果：M组p-JNK蛋白及α-SMA各时间点表达均较N组增加，以第14天最为明显（P＜0.05）；各时间点SP组、T组及SP+T组的p-JNK蛋白及α-SMA的表达较M组降低，但仍高于N组（P＜0.05）；SP+T组第14、28天时α-SMA表达较SP组、T组两组降低（P＜0.05）；第14、28天时T组较SP组、SP+T组两组比较p-JNK蛋白表达高（P＜0.05）。5、M组p-JNK蛋白与α-SMA含量呈显著正相关（免疫组化：r=0.858，P＜0.05；Westernblotting：r=0.779，P＜0.05）。结论：沙利度胺可能通过抑制p-JNK蛋白及α-SMA的表达，从而抑制博莱霉素所致的大鼠肺纤维化。关键词：沙利度胺；肺纤维化；JNK丝裂原活化蛋白激酶；α-平滑肌肌动蛋白AbstractBackground:Pulmonaryfibrosisisachronic,pro