肾积水后mirna-210及其下游基因的表达变化-expression changes of mirna - 210 and its downstream genes after hydronephrosis.docxVIP

摘要目的和意义：肾积水是多种肾内外因素作用于泌尿系后引起的一种常见的临床表现。如果引起肾积水的因素不能得到及时解除，肾脏皮质会因为受到尿液压迫而引起肾组织的缺血缺氧，因此尽快解除引起肾积水的因素对于肾功能的保护有着极为重要的意义。研究发现新生血管的发生发展主要通过VEGF信号通路来发挥调控功能。最近研究报道发现miRNA可以调控血管新生，缺血缺氧后组织中HIF-1α表达上调，某些miRNA表达也会发生显著的改变。研究还提示miRNA-210这一作用可能是通过调控下游基因参与血管生成的信号通路并以此影响血管生成。本研究通过制作小鼠单侧肾积水病理模型，观察小鼠肾积水后缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子（VEGF）、microRNA-210在不同时间点的的表达变化并探讨其调控机制。方法：采用丝线结扎单侧输尿管的方法制备急性完全性单侧肾积水病理模型（UUO模型），分为假手术对照组和单侧肾积水组，于单侧肾积水后2d、5d、9d、14d分别颈椎脱臼处死小鼠收集患肾。采用荧光实时定量PCR的方法检测单侧肾积水后患肾各个时间点HIF-1mRNA、VEGFmRNA及microRNA-210的表达变化，采用western-blot方法检测单侧肾积水后各时间点HIF-1α蛋白的表达变化趋势。结果：HIF-1αmRNA表达水平在肾积水后表达量逐渐上调直到处死该实验动物（P均＜0.05）。VEGFmRNA及microRNA-210表达水平在单侧肾积水后2d升高并达到高峰，于单侧肾积水后5d、9d、14d表达量逐渐下调（P均＜0.05）。HIF-1α蛋白表达量逐渐上调。结论：实验结果表明单侧肾积水后患肾HIF-1αmRNA及蛋白表达逐步上调，VEGFmRNA及microRNA-210表达出现一过性上调，可能与单侧肾积水后患肾II皮质被尿液压迫，机体对缺氧、缺血产生适应性反应有一定关系。关键词：小鼠；肾积水；缺氧诱导因子-1α；血管内皮生长因子；microRNA-210；UUOIIIABSTRACTObjective：Hydronephrosisisakindofclinicalsymptomofinternalandexternalfactorsactonurinarytract,ifthefactorscausinghydronephrosiscannotbereleased,thekidneywouldbeischemiaandhypoxiabecauseoftheoppressionofurine.itissignificancetoreleasetheobstacleassoonaspossibleforprotecttherenal.ThestudyfoundtheoccurrenceofvascularprimarilythroughtheVEGFsignalingpathway.RecentlythestudyhavefoundthatmiRNAcanregulateangiogenesis,HIFwouldbeupregulationandsomeofmiRNAwouldbeexpressedsignificantlyafterischemiaorhypoxia.ResearchalsosuggeststhatmiRNA-210mayinfluenceangiogenicbyregulatingdownstreamgenes.Thisstudyismainlyobservetheexpressionofinduciblefactor-1(HIF-1)vascularendothelialgrowthfactor(VEGF)microRNA-210andexploretheregulatorymechanismafterunilateralureteralocclusion(UUO).Methods:theUUOmodelsaremadebyligationunilateralureteralwithsilk,andtheexperimentdividedintoshamanduuo,Allthemiceweresacrificedbycervicaldislocationafter2,5or14daysofUUO.thekidneysampleswereexaminedforHIF-1mRNA,VEGFmRNAandmiR-210byquantitativeReal-Timereversetranscription-polymerasechainreaction(RT-PCR),HIF-1proteinbyWestern-blotting.Results:theexpressionlevelofHIF-1mRNAwasg