维生素c e对过量氟导致机体损害的干预作用研究-intervention effect of vitamin c e on body damage caused by excessive fluorine.docx

中文摘要 中文摘要 新疆医科大学医学博士学位论文 新疆医科大学医学博士学位论文 — — PAGE 11— — — PAGE 10— 维生素 C、E 对过量氟导致机体损害的干预作用研究 博士研究生：阿斯木古丽·克力木 导 师：刘开泰 教 授 郑玉建 教 授 中文摘要 目的： 本研究通过动物实验，观察氟中毒大鼠尿氟排泄情况、牙齿的变化和全身骨骼 X 线改变以及 VC、VE 不同剂量单独干预和联合干预对氟中毒大鼠尿氟排泄、氟斑 牙和骨骼 X 线改变的影响。探讨机体在高氟状态下的氟排泄情况、牙齿和骨骼改变 及 VC、VE 在此过程中的干预作用。 观察氟中毒大鼠肝、肾、脑组织抗氧化酶类及脂质过氧化物的变化以及 VC、 VE 不同剂量单独干预和联合干预对高氟状态下大鼠抗氧化酶活性及脂质过氧化物 的影响，以期探讨过量氟引起肝、肾、脑组织损伤的机制。 观察氟中毒大鼠肝、肾、脑组织形态学和超微结构的改变，探讨 VC、VE 不同 剂量单独干预和联合干预对氟中毒大鼠肝、肾、脑组织形态学和超微结构的保护作 用，以期为有效干预、防治地方性氟中毒提供组织形态学依据。 观察氟中毒大鼠肝、肾、脑细胞凋亡发生情况以及细胞凋亡调控蛋白 bcl-2、p53、 bax 和 c-myc 以及 bcl-2mRNA 在氟中毒大鼠肝、肾和脑组织中的表达情况，探讨 VC、VE 不同剂量单独干预和联合干预对氟中毒大鼠肝、肾和脑细胞凋亡及其相关 蛋白和 bcl-2mRNA 表达所起的主要作用，为阐明氟对肝、肾、脑损伤的机制提供依 据。 方法： 动物分组与处理：将体质量为 80～120g Wistar 大鼠 120 只，雌雄各半，随机将 其分为 9 组，A.正常对照组：不做任何处理，饮用纯净水；B.染氟组：自由饮用含 氟化钠（NaF）150 mg /L 的高氟水；C.VC+染氟组：在染氟基础上分别灌胃给予 VC①C1 组（VC 低剂量干预组），VC50 mg·kg-1·d-1 ②C2 组（VC 中剂量干预组），VC100 mg·kg-1·d-1③C3 组（VC 高剂量干预组），VC150 mg·kg-1·d-1；D.VE+染氟组，在染氟 基础上分别灌胃给予 VE①D1 组（VE 低剂量干预组），VE25 mg·kg-1·d-1 ②D2 组（VE 中剂量干预组），VE50 mg·kg-1·d-1③D3 组（VE 高剂量干预组），VE75 mg·kg-1·d-1； VC+VE+染氟组（VC、VE 联合干预组）：在染氟基础上同时灌胃给予 VC100 mg·kg-1·d-1 和 VE50 mg·kg-1·d-1。每组大鼠均饲基础饲料，自由摄食，实验共进行 9 月（38.5 周）。实验结束后处死大鼠取肝、肾、脑，测各项指标。 分别于实验第 5 周、第 10 周和第 15 周收集 24h 尿液，采用氟离子选择性电极 法测定尿氟含量。处死动物前一天，用瑞士产 Swissray 最新一代直接数字化 X 线机 对大鼠全身骨骼进行 X 线拍片。 用黄嘌呤氧化酶法测定肝、肾、脑组织超氧化物歧化酶（SOD）活力、用比色 法测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力、用可见光分光光度法测定过氧化氢酶 （CAT）活性；用硫代巴比妥酸法（TBA）测定脂质过氧化物丙二醛（MDA）含量。 用光学显微镜和透射电子显微镜观察各组大鼠肝、肾、脑组织形态学和超微结 构的变化。 采用 DNA 琼脂糖凝胶电泳检测肝、肾和脑细胞凋亡，采用免疫组化检测技术 观察肝、肾和脑组织 p53、c-myc、bcl-2 和 bax 蛋白的表达以及采用原位杂交技术检 测肝、肾和脑 bcl-2mRNA 的表达。 统计分析：应用 SPSS13.0 for windows 统计软件对实验数据进行整理汇总，多 个样本均数的比较用单向方差分析，两两比较用 SNK（q）检验，双指标相关分析 用 Pearson 相关分析，数据用 x ± s 表示，检验水准 α=0.05。用 Microsoft Excel 2003 软件绘制统计图。 结果： 24 小时尿氟含量在染毒第 15 周＞第 10 周＞第 5 周（P＜0.05），说明随着染氟 时间的延长大鼠尿氟的排除量逐渐升高。干预 VC、VE 均可使大鼠尿氟含量显著升 高。干预 VC、VE 不同剂量组之间尿氟含量有所不同，即 VC、VE 低剂量干预组尿 氟含量显著高于中、高剂量干预组。VC、VE 联合干预组在染氟的不同时间均显著 高于其余组（P＜0.05）。除正常对照组以外，其他组均出现不同程度的氟斑牙征象， 染氟组氟斑牙出现时间最早且程度最严重。106 例实验大鼠中共有 18 例（17%）（正 常对照组和部分 VC、VE 干预组）表现出正常骨骼 X 线征象，骨结构完全正常；其 余 88 例（100%）大鼠均出