微小rna145靶向抑制hif 2α表达对神经母细胞瘤增殖 凋亡及血管生成的影响-effects of targeting inhibition of hif 2α expression by microrna 145 on proliferation, apoptosis and angiogenesis of neuroblastoma.docxVIP

独创性声明 本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。 尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过 的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识 到本人将承担本声明引起的一切法律后果。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关 部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将 本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段 保存和汇编本学位论文。 保密□，在 年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密□。 （请在???上方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 目 录 缩略词表 1 研究背景 3 参考文献 5 中文摘要 7 ABSTRACT 10 第一部分 miRNA-145 在神经母细胞瘤组织中的表达及其真核表达载体构建 13 实验材料 13 实验方法 14 结 果 17 讨 论 18 参考文献 19 第二部分 miRNA-145 对神经母细胞瘤增殖、凋亡和血管生成的调控作用 21 实验材料 21 实验方法 23 结 果 28 讨 论 38 参考文献 39 第三部分 miRNA-145 调控神经母细胞瘤增殖凋亡和血管生成的机制研究 42 实验材料 42 实验方法 45 结 果 51 讨 论 59 参考文献 60 研究小结 63 综 述 64 参考文献 70 致 谢 77  国家自然科学基金资助项目 (编号:81071997) 教育部新世纪优秀人才支持计划 (编号: NCET-06-0641) 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 2 1 缩略词表 缩略语英文全文中文全文Ap ATCC bp BSA cDNA DEPC dNTP dsDNA ECL EDTA FACS FBS GAPDHampicillin American Type Culture Collection base pair bovine albumin serum complementary DNA diethyl pyrocarbonate deoxy-ribonucleoside triphosphate double stranded DNA enhanced chemi-luminescence ethylene diamine tetracetic acid fluorescence activated cell sorting fetal bovine serum glyceraldehydes 3-phosphate氨卞青霉素 美国标准菌收藏所 碱基对 牛血清白蛋白 互补 DNA 焦碳酸二乙酯 三磷酸脱氧核(糖核)苷 双链 DNA 增敏化学发光显色 乙二胺四乙酸 流式细胞术 胎牛血清 三磷酸甘油醛脱氢酶DehydrogenaGFP h HIF-2α HRP kD LB min miRNA mol mRNAGreen fluorescent protein hour Hypoxia induced factor-2α horseradish peroxidase kilodalton lurib-Bertani medium minute microRNA mole(s) messenger RNA绿色荧光蛋白 小时 低氧诱导因子 2α 辣根过氧化物酶 千道尔顿 LB 培养基 分钟 微小 RNA 摩尔数 信使 RNA2 MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide 四甲基偶氮唑蓝 NB Neuroblastoma 神经母细胞瘤 nt NC OD PAGE PBS PCR PI qPCR rpm RNase RT-PCR snucleotide negative control optical density polyacrylamide gel eletrophoresis phosphate-buffered saline polymerase chain reaction propidium iodide quantitative PCR revolutions per minute ribonuclease reverse transcriptase-polymerase second