2种方法测定人血白蛋白中蛋白质含量分析.docVIP

2种方法测定人血白蛋白中蛋白质含量分析 　　[摘 要]为了更加精确的测定人血白蛋白的蛋白质含量，本研究采用自动凯氏定氮仪和半微量凯氏定氮法两种方法来测定蛋白质的含量。用自动系统凯氏定氮仪做一次时间所用时间约2小时，测定蛋白质含量为19.9%；半微量凯氏定氮法做一次时间所用时间约4小时，测定蛋白质含量为19.7%，即半微量凯氏定氮法比自动系统凯氏定氮法耗时比较长，且半微量法所测蛋白质含量值与自动定氮仪所测结果比较偏低。可见应用自动系统凯氏定氮仪测定蛋白质含量结果准确可靠，且快速。 　　[关键词]凯氏定氮法 蛋白质含量 自动系统 半微量凯氏定氮法 　　中图分类号：R446.112 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）04-0639-01 　　1 仪器设备、试剂及样品 　　1.1仪器设备：KJ-2300型自动定氮仪、半微量凯氏定氮装置、消化器、通风厨 　　1.2试剂 　　1.2.1自动系统凯氏定氮法：浓硫酸、消化剂（片剂）、40%氢氧化钠溶液、甲基红溴甲酚绿混合指示剂（3份0.2%的溴甲酚绿指示剂+2份0.1%甲基红指示剂）、1%硼酸吸收液（称取50g硼酸，加5000ml水溶解，过滤，然后加50ml 0.1%溴甲酚绿指示剂，35ml 0.1%甲基红指示剂，摇匀）、0.1mol/L盐酸滴定液、10%钨酸钠溶液、0.33mol/L 硫酸溶液。 　　1.2.2半微量凯氏定氮法：消化剂（ 称取硫酸铜（CuSO4?5H2O）10 g、硫酸钾（K2SO4）100 g ，置乳钵内，共同研细，混匀）、混合指示液（0.2%溴甲酚绿乙醇溶液5份与0.1%甲基红乙醇溶液2份混合配成）、2%硼酸吸收液（称取硼酸20g，加水溶解并稀释成1000ml，加混合指示液10ml，混匀）、50%氢氧化钠溶液、0.05mol/L硫酸滴定液（用前稀释10倍）。 　　1.3 供试样品：人血白蛋白（西安回天血液制品有限责任公司，批。 　　2 方法 　　2.1自动系统凯氏定氮法 　　2.1.1 钨酸除蛋白质 　　取样品5ml，加水75ml，加0.33mol/L硫酸溶液10ml，充分混匀后加10%钨酸钠溶液10ml，静置30分钟，过滤。滤液应清亮，如混浊应反复过滤到清亮备用。 　　2.1.2加样 空白管：水1ml+10ml浓硫酸+1片消化剂。总氮管：供试品1ml+10ml浓硫酸+1片消化剂。非蛋白氮管：除蛋白滤液25ml+10ml浓硫酸+1片消化剂。 　　质控管：质控品1ml+10ml浓硫酸+1片消化剂。各管均做两管平行样。 　　2.1.3 消化 　　将涤气装置安在加好样的消化管上，然后将消化管连支架放入预热好的消化器（420 ℃）上，将水抽气泵水龙头全开，5分钟后调小抽气泵水流使酸烟恰好吸入涤气罩头。消化至全部样品变为透明的蓝绿色澄清液体（约60分钟），消化完毕，关消化器，将装有涤气装置的消化管连支架一起从消化器中取出，冷却15―20分钟，可用通风橱以加快冷却速度。 　　2.1.4 计算：供试品蛋白质含量（%）= 供试品含氮量×0. 625。 　　2.1.5 回收率测定：为了考确保仪器的准确性，做回收率测定。记录如下：盐酸滴定液浓度0.1003 mol/L。将硫酸铵在105℃恒重：第一次称重（W1） 26.45683 g，第二次称重（W2）26.45671 g，两次称重差值（W1-W2）0.00012 g，已恒重。 　　然后称取已恒重的硫酸铵5.03712 g，于100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，配置成5%硫酸铵溶液。 　　用单标线吸管取1ml5%硫酸铵溶液（相当于0.0504 在WEIGHT后输入）于定氮管中（平行二管），在回收率[%Recovery]下输入参照物的纯度。 　　（99.0%=20.98%N） 　　蒸馏后仪器自动算出回收率。 　　注：回收率= 　　2.2 半微量凯氏定氮法 　　2.2.1 实验前准备工作 　　半微量凯氏定氮仪：在蒸汽发生瓶内加足水，并滴加数滴硫酸及甲基红指示剂至明显红色。检查各管道，接口处不漏气。使为良好状态。 　　供试品溶液的制备：从冰箱中取出供试品，放置于室内，与环境温度平衡。 　　样品处理：精密量取供试品1 ml，用生理氯化钠溶液对供试品进行25倍稀释。 　　2.2.2消化 　　精密量取供试品（约相当于含氮量1.0～2.0mg）1ml，置于凯氏定氮瓶中，加消化剂约0.3g，硫酸1ml消化至澄明，呈蓝绿色，继续消化约60分钟。 　　2.2.3 蒸馏 　　蒸馏前蒸洗蒸馏器15分钟以上。取2%硼酸吸收液10ml置100ml锥形瓶内，将凯氏蒸馏器冷凝管末端浸入硼酸吸收液内，将消化好的供试品移入凯氏蒸馏器内，用水洗定氮瓶3～4次，