ABI 7500与TL 988实时荧光PCR仪性能评价.docVIP

ABI 7500与TL 988实时荧光PCR仪性能评价 　　[摘要] 目的 探讨ABI 7500与TL 988荧光定量PCR仪之间的性能差异。 方法 参照EP9-A2文件中的评价标准，两台仪器分别对5种不同浓度的甲型流感病毒阳性质控品进行检测，每个浓度测量20次，比对两种仪器的精密度、灵敏度，并评价两台仪器结果一致性。 结果 精密度：TL 988的变异系数（CV）从0.68%到1.52%，ABI 7500的CV从1.93%到2.69%。两台仪器在检测高浓度的甲型流感病毒DNA时（107、106、105 copies/mL）差异无统计学意义（P0.05），检测低浓度的病毒DNA时（104、103 copies/mL）差异有统计学意义（P0.05）。灵敏度：两种仪器检测浓度103 copies/mL时，TL 988阳性检出率为100%，ABI 7500检出率为0。两种仪器检测数据相关性良好（r=0.998）。结论 荧光定量TL 988 PCR仪器的性能（精密度和灵敏度）比ABI 7500好。 　　[关键词] 荧光定量PCR仪；比对；精密度；灵敏度；一致性 　　[中图分类号] R446.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）02-0155-02 　　根据ISO 15189要求，实验室需要定期对使用的仪器进行性能评估，当实验室使用两套及以上检测系统检测同一项目时，应比对数据表明其检测结果一致性。现笔者按EP9-A2文件要求[1-5]，对美国ABI 7500和国产TL 988的主要性能指标进行评估，以了解结果差异性与一致性，从而寻找国产仪器可替代国外产品的可能性。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　（1）主要仪器：ABI 7500和TL 988荧光定量PCR仪、生物安全柜、低温高速离心机、超净工作台等。 　　（2）试剂：上海之江生物科技有限公司提供的甲型流感病毒荧光定量PCR检测试剂盒。检测标本：阳性定量质控品（含甲型流感病毒DNA的浓度为107 copies/mL），用free H2O准确10倍比稀释成106、105、104、103 copies/mL，充分混匀，分装250 μL到1.5 mL的eppendorf管中备用。 　　1.2 方法 　　1.2.1 精密度测定 按NCCLS标准，分别在ABI 7500和TL 988荧光定量PCR仪上同时检测107、106、105、104 copies/mL四种浓度的阳性质控品。各浓度均测定20次，计算其均值、标准差和变异系数。 　　1.2.2 灵敏度测定 分别取107、106、105、104、103 copies/mL五个浓度标本在两台PCR仪上进行检测，根据阳性检测率分析其灵敏度。 　　1.2.3相关性检测 通过重复性试验中的数据，分别取107、106、105、104 copies/mL浓度的检测结果的平均值，分析两台仪器的数据相关性。 　　1.3统计学方法 　　应用SPSS 17.0统计学软件对数据分析处理。检查是否有离群值，对数据进行初步检查，两变量间线性关系分析采用直线相关及回归分析。P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1两台仪器精密度结果比较 　　TL 988 和ABI 7500两台荧光PCR仪器的精密度结果比较，见表1。可以看出TL 988测得各浓度数据的变异系数（CV）从0.68%到1.52%，ABI 7500测得各浓度数据的变异系数（CV）是从1.93%到2.69%，变异系数（CV）均在要求范围内（0.05）。此外，关于相同浓度的标准品检测结果的Ct值和标准差分析，显示两台PCR仪的批内重复性均良好。 　　表1 两台仪器精密度结果比较 　　2.2两台仪器灵敏度结果比较 　　甲型流感病毒DNA的浓度在107、106、105、104 copies/mL时，两台仪器的阳性检出率均为100%，当浓度为103 copies/mL时，TL 988检出率依然为100%，但ABI 7500的检出率为0。灵敏度方面，TL988要比ABI 7500能检测到更低浓度，即灵敏度相对较高（P0.05）。 　　2.3 相关性比较 　　两台仪器对各标本的甲型流感病毒DNA的含量进行测定，结果表明，两台仪器测定值的回归直线方程为：y=1.2364x-5.2097（r=0.998），具有良好的直线相关和回归关系。 　　3 讨论 　　在2013年全球高科技产业值中，精密仪器医疗设备约为3万亿美金，占13%。而精密医疗设备基本上被国外所垄断。医疗设备是现代医疗业发展的必备手段，所以需要加快精密仪器的国有化进程，降低成本，推动民族品牌企业不断发展，降低老百姓就医费用成本。 　　荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光