miRNA―181a在系统性红斑狼疮患者血浆中表达及临床意义.docVIP

miRNA―181a在系统性红斑狼疮患者血浆中表达及临床意义 　　[摘要] 目的 研究miRNA-181a检测在系统性红斑狼疮患者临床诊治中的价值。 方法 采用反转录PCR法（RT-PCR）检测36例2015年1～6月来我院门诊和住院就诊的系统性红斑狼疮（SLE）患者及30例同期来我院健康体检的对照者的血浆miRNA-181a相对表达量，同时测定SLE患者的血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）与免疫球蛋白IgG、IgA、IgM和补体C3、C4及系统性红斑狼疮活动指数（SLEDAI）等，分析miRNA-181a与这些临床指标的关系。 结果 SLE组miRNA-181a相对表达水平显著高于健康对照组，SLE活动期组高于SLE稳定期组，差异均有统计学意义（P0.05）。SLE患者血浆miRNA-181a相对表达水平与血沉、C反应蛋白、SLEDAI评分等呈正相关（r=0.48、0.56、0.62，P均0.05）。 结论 血浆miRNA-181a浓度在SLE患者体内明显升高，且与SLE患者目前常用的一些临床评估指标高度相关，miRNA-181a有可能成为一个新的SLE疾病活动度评估及预后判断的分子标志物。 　　[关键词] miRNA-181a；血浆；系统性红斑狼疮；临床指标；反转录PCR 　　[中图分类号] R593.241 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）32-0037-04 　　系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种自身免疫介导的以免疫性炎症为突出表现、常累及多系统、多器官的自身免疫性疾病。SLE病因复杂，发病机制尚不明确，机体的免疫异常被认为是发病的关键原因。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类广泛存在于真核生物中、长度约21～25个核苷酸的非编码小分子RNA。它可通过与靶基因mRNA序列的特异性相互作用降解mRNA或抑制靶基因的翻译，还可在特定条件下上调靶基因的蛋白表达和mRNA水平。研究表明，在自身免疫性疾病的发生与发展过程中，microRNA发挥着不可忽视的作用[1]。 　　本研究采用实时荧光定量PCR法检测36例SLE患者和30例健康人群血浆的miRNA-181a相对表达量，并同时检测SLE患者血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）、免疫球蛋白IgG、IgA、IgM和补体C3、C4及系统性红斑狼疮活动指数（SLEDAI）等，分析miRNA-181a水平与这些临床指标的关系，探讨miRNA-181a在SLE疾病中的临床价值。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选择2015年1～6月来我院门诊和住院就诊的SLE患者36例，SLE诊断均符合1997年美国风湿病学会修订的SLE诊断指南，排除患有其他全身性疾病的患者。其中男7例，女29例，年龄23～61岁，平均（37±9）岁。系统性红斑狼疮活动指数（SLEDAI）≥6（活动期）21例，SLEDAI6（稳定期）15例；另外选取来我院健康体检正常的30例人群作为对照人群（正常对照组），排除有高血压、心脏病、糖尿病、自身免疫性疾病及其他疾病者，不得具备SLE诊断标准中的任何一条。其中男5例，女25例，年龄21～57岁，平均年龄（36±7）岁，两组间年龄、性别等差异无统计学意义。患者进入研究后即对患者进行全面的检查并根据检查情况计算其SLEDAI评分[2]。血沉的检测采用魏氏法，C反应蛋白与免疫球蛋白IgG、、IgA、IgM和补体C3、C4的检测均在Beckman coulter Immage 800上进行。本研究得到了嘉兴市第二医院医学伦理委员会的批准，所有受试对象均知情同意。 　　1.2 仪器与试剂 　　实时荧光定量PCR仪Roche Cobas Z 480购自美国Roche公司，Eppendorf D30紫外分光光度计购自Eppendorf公司，PCR引物由上海生工合成，Trizol RNA提取试剂、BIOGHC Elitefast SYBR Kit及BIOG Super Reverse Transcriptase均购自Invitrogell公司。 　　1.3实验方法 　　1.3.1 标本处理 取SLE患者静脉血2 mL置于EDTA抗凝管中，800 g离心10 min后吸取上清血浆至1.5 mL EP管中，再次800 g离心10 min，取上清血浆-80℃冷冻保存，统一检测。正常对照组标本处理同前。 　　1.3.2 总RNA的提取与纯化 用 Trizol RNA提取试剂盒提取和纯化总RNA，按试剂说明书操作。应用Eppendor D30紫外分光光度仪检测总RNA 浓度和质量，检测合格者置-80℃冰箱冻存待用。 　　1.3.3 miRNA-181a的逆转