ECLIPSE 50试剂盒检测生鲜牛乳中抗生素残留结果误判研究.docVIP

ECLIPSE 50试剂盒检测生鲜牛乳中抗生素残留结果误判研究 　　摘要:选用ECLIPSE 50试剂盒检测生鲜牛乳中抗生素残留,实验发现生鲜牛乳pH值下降对抗生素残留接近试剂盒检出限时易产生假阴性结果,初乳易产生假阳性结果,是否预热处理对检测结果无直接影响。 　　关键词:生鲜牛乳;抗生素;ECLIPSE 50试剂盒;结果误判 　　中图分类号:TS252.7文献标识码:A文章编号:1007-273X(2010)10-0011-02 　　 　　牛奶和奶制品中含有抗生素,人们长期食用危害人体健康,其危害主要有:①使人体产生耐药性,给今后患病使用抗生素治疗带来不良影响;②抗生素对过敏体质的人会出现过敏反应,危害健康;③破坏人体内正常菌群的平衡状态,使菌群失调[1]。原料乳中残留抗生素影响乳制品加工,如发酵奶制品(酸奶和干酪)的生产依赖于乳酸菌的生长,而乳酸菌的生长受抗生素的强烈抑制,易导致发酵失败。牛奶中抗生素残留问题日益受到社会各界的重视。 　　我国原料乳及乳制品中抗生素残留严重,乳中抗生素检测是我国乳品加工过程中至为关注的问题。目前,牛乳中抗生素残留的检测方法大致分三类:生物法、免疫法、仪器分析法[2～4]。不同方法各有优缺点,而目前对于原料乳来说,简便、快速、准确、灵敏性高的微生物检测方法应用甚广。ECLIPSE 50试剂盒是一种微孔板,利用微生物学原理,每个微孔中含有嗜热脂肪芽孢杆菌菌种的琼脂培养基和pH指示剂。当微孔板在65℃培养时,孢子发育生长代谢产酸,使培养基的pH值降低,在pH指示剂的作用下原来的蓝紫色将会变为黄色、黄绿色。ECLIPSE 50是一种适合于牧场定性检测抗生素的试剂盒,特点是快速、安全、精确、稳定。本文主要对ECLIPSE 50试剂盒在实际检测过程中常出现的结果误判现象进行分析研究,为相关微生物检测抗生素方法提供理论参考。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1材料和仪器 　　生鲜牛乳、无抗的生鲜牛乳、初乳、末乳(均来源于贵阳市周边某养殖小区);市售兽用80万IU青霉素G(哈药集团制药总厂);ECLIPSE 50试剂盒;恒温水浴锅。 　　1.2检验方法 　　1.2.1试剂盒检测步骤和结果判读根据待检样品的数量用刀从微孔板上裁下所需的微孔,注意不要划开其他微孔上的金属膜以防微孔内培养基挥发以致干结。裁下的微孔放入空的塑料架上,揭去微孔上的金属薄膜,用微量取样器在每个微孔中加入50μL牛奶样品(同时用已知无抗奶做阴性对照,用已加入0.5IU青霉素的奶样做阳性对照;取样头应取一个样换一个),再用黏胶薄膜小心地密封好微孔板,置于 (65±2)℃的水浴锅中恒温培养2.5～3.0h。从微孔侧面观察结果,黄绿色或者黄色表示抗生素不存在(阴性);蓝、紫色表示抗生素存在(阳性)。 　　1.2.2试剂盒检出限的确定以市售兽用80万IU青霉素G作为标准物质,分别稀释至0.050、0.020、0.010、0.008、0.006、0.004、0.003、0.002、0.001IU/mL,按1.2.1操作。 　　1.2.3 牛乳pH值对结果的影响笔者曾经对30份生鲜牛乳进行pH值测定,初始时pH值为6.30～6.75,在4℃温度下保存48h后,其pH值下降为4.50～6.40。考虑此种情况,调节已知无抗生鲜牛乳的pH值分别为7.0、6.8、6.5、6.0、5.8、5.5、5.0、4.6时,加入不同浓度的标准青霉素G,使其含量分别为0.010、0.008、0.006、0.004、0.003、0.002、0.001IU/mL时按1.2.1操作。 　　1.2.4牛乳预热对结果的影响取1份牛乳加入不同浓度的标准青霉素G,使其含量分别为0.010、0.008、0.006、0.004、0.003、0.002、0.001IU/mL,将以上6份不同青霉素G浓度的牛乳一分为二,其中一份在80℃加热5min,快速冷却至室温后按1.2.1操作;另一份直接按1.2.1操作。 　　1.2.5初乳和末乳对结果的影响分别取未使用抗生素的奶牛不同时间段的初乳和末乳进行实验。 　　 　　2结果与讨论 　　 　　2.1试剂盒检出限 　　不同浓度的青霉素G的检测结果如表1所示,ECLIPSE 50试剂盒对青霉素G的检出限为0.004 IU/mL。 　　2.2pH值对结果的影响 　　如表2所示,由表2可见,牛乳pH值高于5.8时,ECLIPSE 50试剂盒对青霉素G的检测结果不变,当牛乳pH值为5.5时,试剂盒对青霉素G的检出限有所上升,为0.006IU/mL,而当pH值下降到5.0时,试剂盒对青霉素G的检出限变为0.008IU/mL。也就是说当牛乳本身抗生素含量接近试剂盒检出限时,随着牛乳保存时间的延长,牛乳内微生物