Tim―3及其配体Gal―9与宫颈鳞状细胞癌病理分级和预后相关性研究.docVIP

Tim―3及其配体Gal―9与宫颈鳞状细胞癌病理分级和预后相关性研究 　　[摘要] 目的 探究不同病理分级的宫颈鳞状细胞癌患者血清及癌组织中T细胞免疫球蛋白黏蛋白3（Tim-3）及其配体半乳凝素9（Gal-9）表达，分析其临床意义。 方法 收集17例上皮瘤样病变（CIN），38例含低（PSCC）、中（MSCC）、高分化（WSCC）宫颈鳞状细胞癌（SCC）组织以及血清样本，17例正常妇女血清，并依次分为CIN组、PSCC组、MSCC组、WSCC组以及正常组。分别采用蛋白质免疫杂交技术（Western blot）以及qRT-PCR技术检测CIN组、PSCC组、MSCC组以及WSCC组组织样本中Tim-3以及Gal-9的表达，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测CIN组、PSCC组、MSCC组、WSCC组以及正常组血清样本中Gal-9的表达水平。分别比较各组组织中Tim-3和Gal-9的表达以及血清中Gal-9的表达水平与宫颈鳞状细胞癌不同病理分级的相关性。 结果 Western blot与qRT-PCR结果均显示Tim-3和Gal-9在SCC各组组织中表达高于CIN组（P0.05），且与病理分级呈正相关（r=0.738、0.671，P0.05）。ELISA结果亦显示Gal-9在SCC各组血清中高于正常组以及CIN组（P0.05），切与病理分级呈正相关性（r=0.687，P0.05）。 结论 Tim-3及其配体Gal-9的表达与宫颈鳞状细胞癌病理分级成正相关，Tim-3以及Gal-9可作为临床诊断及预后的有义指标。 　　[关键词] 宫颈鳞状细胞癌；病理分级；Tim-3 ；Gal-9 　　[中图分类号] R36 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）10（a）-0063-03 　　T细胞免疫球蛋白黏蛋白家族（Tim family）是一类参与调节机体免疫的关键分子，自发现以来，其功能受到广泛关注。目前人们研究比较多的Tim分子主要是Tim-1，Tim-3，Tim-4，等，其中Tim-3因其在抗肿瘤免疫方面的作用而被重视[1]。越来越多的研究发现，Tim-3表达于多种肿瘤相关的免疫细胞，且其表达水平和功能各异，主要是通过参与T细胞功能障碍或是耗竭以及扩增髓系来源移植细胞增殖等在肿瘤免疫中其着负向调控作用[2]。而半乳凝素9（Gal-9）作为Tim-3的特异性配体，与Tim-3一起调控机体抗肿瘤的免疫应答[3]。 　　在发展中国家，宫颈鳞状细胞癌（SCC）在女性恶性肿瘤中位居第2位，仅次于乳腺癌，严重威胁着妇女的健康。该研究应用Western blot、qRT-PCR以及ELISA技术，探究Tim-3及其配体Gal-9在不同分化宫颈鳞癌中的表达，从而为临床寻找有意义的检测指标。现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　经患者知情同意，收集江门市人民医院2012年6月―2014年6月就诊宫颈鳞状细胞癌（SCC）患者组织及血清样本共38例，根据组织病理学分级，其中低分化癌（PSCC）11例，中分化癌（MSCC）12例，高分化癌（WSCC）15例，依次设为PSCC组、MSCC组以及WSCC组。收集同期来诊上皮瘤样病变（CIN）患者组织及血清样本共17例以及健康妇女血清样本共17例，分别设为CIN组以及正常组。其中正常组、CIN组、PSCC组、MSCC组、WSCC组患者平均年龄分别为41±3.2、41.5±2.3、40±2.0、41±2.5、43±3.0岁，各组年龄经t检验分析，差异无统计学意义（P0.05），各组患者术前均未经过放化疗。 　　1.2 方法 　　1.2.1 癌组织样本中Tim-3及Gal-9表达检测 采用Western blot技术检测CIN组、PSCC组、MSCC组、WSCC组组织样本中Tim-3以及Gal-9蛋白的表达。分别取各组组织样本100mg，采用IM-PER蛋白抽提试剂（购自Therrmo公司）抽提蛋白，通过BCA蛋白浓度定量试剂盒（购自Thermo公司）进行定量，定量蛋白上样后进行电泳及转膜，分别采用抗Tim-3抗体以及抗Gal-9抗体对硝酸纤维素膜进行第1次孵育，分别采用HRP标记的相应抗体进行二次孵育，采用荧光化学法显色，观察结果；采用qRT-PCR检测CIN组、PSCC组、MSCC组、WSCC组组织中Tim-9以及Gal-9的表达。取各组组织样本100 mg，采用TRIZOL法抽提组织样本总RNA，经一步法反转录试剂盒（购自Takara公司）进行反转录PCR后，采用SYBRR荧光定量试剂进行qRT-PCR进行定量检测。以上检测均以GAPDH作为内参，以CIN组作为对照组，其中qRT-PCR引物序列如下： 　　1.2.2 血清中Gal-9的表达检测