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PGPR微生物肥代替部分化肥对豌豆生长影响 　　摘要：对前期从植物根际分离的促生菌（PGPR）进一步测定，筛选出5株优良溶磷菌株和1株根瘤菌株，并利用其制成PGPR微生物肥，研究其替代20%～30%化肥对豌豆生长及产量的影响。结果表明：菌株LM43、LH123、Lx191、Jm92、LHS11与GDB27互不产生拮抗，可制成PGPR微生物肥，研制的PGPR微生物肥替代20%化肥可使豌豆株高增加6.3%，经济产量提高3.2%，减少可购买性投入220.00～358.00元/hm2。 　　关键词：PGPR；微生物肥；化肥；豌豆 　　中图分类号：S 144.3文献标识码：A文章编号2014 　　我国农牧业生产中，氮、磷素供应量直接影响作物潜在生产性能和生态功能的发挥，而化肥一直被认为是解决这一问题的主要途径。在经济落后且土地贫瘠的西部地区，大量使用高成本的化肥是增加农牧业生产成本的主要因素之一[1]。随着化肥施用量的增加，出现了肥效下降、利用率降低等现象，此外，生产化肥对非再生能源消耗大，破坏土壤结构及微生物多样性等，加剧土壤退化。因此，探寻新的低能耗、低排放及环境友好型肥料以部分替代化肥，实现高效益的循环农业已显得很重要。 　　研究表明，PGPR微生物肥具有良好的固氮、溶磷、分泌植物激素及抑制植物致病菌的能力，同时具有生长快、竞争力强、利用碳源谱广等特点[2-4]。接种PGPR复合制剂，与常规施肥相比，大豆早熟2～3 d，根瘤数增加3.0～26.8个/株，百粒质量增加0.2～0.8 g，产量提高3.2%～12.7%[5]；施用PGPR接种剂替代20%～30%化肥，玉米株高、地上植物量、穗长、单位面积穗数、穗粒数和经济产量等均有提高[6]；增施促生菌肥与常规施肥相比，地下块茎部分钾素吸收率高出9.98%，氮素吸收率高出19.61%，磷素吸收率高出20.1%，马铃薯产量比常规施肥提高12.4%[7]。试验利用分离自小麦、苜蓿、三叶草、豌豆等植物根际的优良PGPR菌株制成微生物肥，替代20%～30%的化肥，研究其对豌豆生长的影响，以期为定向利用微生物资源提供理论支撑，为发展循环农业，节约购买性资源投入量提供新途径。 　　1材料和方法 　　1.1研究区概况 　　试验地设在甘肃省武威市凉州区，海拔2 100～4 800 m，地处N 37°23′～38°12′，E 101°59′～103°23′，年均温7.8 ℃，极端气温最高36.6 ℃，最低-29.8 ℃。年均降水量60～160 mm，蒸发量1 400～3 010 mm，年日照时数2 200 h，无霜期85～165 d，pH7.2～7.5。 　　1.2供试材料与设计 　　1.2.1供试材料 　　试验豌豆（Pisum sativum）品种MZ1，发芽率85%。菌肥甲由甘肃农业大学草地微生物试验室提供菌种自制；菌肥乙为成品微生物肥料冀生物磷钾肥。化肥尿素（含N 46%），磷二铵（含P 46%，N 18%）。 　　1.2.2试验设计微生物肥甲的筛选：从PGPR供试菌株Lx191、Jm92、Jm170、LM43、LS11、LS12、LS3、LS13、LHS41、LHS42、LHS8、LHS9、LHS11、LHS14、LH11和LH123（由甘肃农业大学草地微生物试验室提供），选出具有农牧业应用潜力的优良促生菌株混合。 　　筛选方法：（1）菌株溶磷能力测定采用溶磷圈法和钼蓝比色法[8-10]；（2）菌株固氮酶活性测定利用气相色谱仪（GC），采用乙炔还原法测定菌株固氮酶活性[9-11]；（3）菌株分泌生长激素（IAA）测定用比色法[12]。 　　根瘤菌扩大培养：将保存在4 ℃培养基（YMA）斜面上的豌豆根瘤菌株GDB27（由甘肃农业大学农学院提供），置于28 ℃环境下1～2 h，画线接种于YMA固体平板培养基上，3～4个重复，28 ℃培养24～48 h。待菌株充分生长后，挑取典型的单菌落划线接种到YMA固体斜面培养基置于28 ℃培养箱。48 h后，取3～5 mL无菌水于试管中，制成菌悬液。500 mL三角瓶中装入200 mL灭菌的YMA液体培养基，在无菌环境下将菌悬液2～3 mL置于三角瓶中，150 r/min，28 ℃摇床培养5～7 d。菌株充分生长后，测定发酵菌液的OD660 nm值。当OD660 nm值0.5时，发酵菌液中的细胞数目109个/mL。无菌条件下，将发酵菌液注入灭菌后的玻璃瓶中密封常温保存。YMA培养基成分为NaCl 0.1 g，K2HPO4 0.5 g，MgSO4?7 H2O 0.2 g，甘露醇10.0 g酵母膏0.5 g，琼脂15.0 g，蒸馏水1 000 mL，pH 6.8。制作方法参照文献[13-15]。