Toll受体4表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎关系探讨.docVIP

Toll受体4表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎关系探讨 　　[摘要] 目的 探讨分析Toll受体4（TLR4）的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系。方法 随机选取2013年1月―2015年4月胎膜早破病例30例（研究组）与正常a晚期妊娠女性30例（对照组），分别测定胎盘组织TLR4定位、表达特点以及白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）水平，予以产后胎膜病理检查。结果 2组TLR4胎盘表达情况以及胎盘TLR4 mRNA水平差异无统计学意义（P0.05）；研究组血清IL-8水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P0.05），TLR4 mRNA水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者，组织绒毛膜羊膜炎者IL-6、IL-8水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者，差异有统计学意义（P0.05）。该组胎膜组织病理检查确认为亚临床型绒毛膜羊膜炎，三期急性炎性改变，Ⅰ期、Ⅱ、Ⅲ期改变逐渐明显。结论 TLR4上升以及IL-8上升均与绒毛膜羊膜炎有关联，IL-8变化关系到胎膜完整性，对TLR4的监测是防控胎膜早破、绒毛膜羊膜炎的关键。 　　[关键词] Toll受体4；表达；胎膜早破；绒毛膜羊膜炎 　　[中图分类号] R4.433 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）07（a）-0001-03 　　胎膜早破主要因感染所致，Toll样受体与固有免疫左右有直接关联，而TLRs作用于细胞信号转导等环节，TLR4关系到内毒素信号传导过程，且可能与胎膜早破绒毛膜羊膜炎的发生有关[1]，该研究随机选取2013年1月―2015年4月胎膜早破病例30例为研究对象，探讨分析了TLR4与胎膜早破绒毛膜羊膜炎之间的关系，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　随机选取2013年1月―2015年4月胎膜早破病例30例（研究组）与正常晚期妊娠女性30例（对照组），研究组年龄22～34岁，平均年龄（26.8±2.4）岁；对照组年龄23～33岁，平均年龄（26.3±2.8）岁，其中15例孕周在28～37周之间（对照1组），另15例孕周≥37周（对照2组）。2组基础资料对比差异无统计学意义（P0.05）。 　　1.2 方法 　　2组均在剖宫产之时剪取脐带附着处胎盘垂直断面中央标本2块，使用0.9%氯化钠溶液将标本漂洗干净，其中1块以液氮冷冻处理，置于-70℃环境中备用，另1块用来提取RNA。 　　2组孕妇分娩前均常规抽取肘静脉血标本各5 mL，高敏放射免疫测定标本中IL-6、IL-8水平，产后均在破口部分剪取胎膜组织标本，以10%甲醛固定送检。 　　免疫组化。冰冻切片取出，厚度维持在10 μm，并以冷丙酮固定处理、将内源性过氧化物酶去除。山羊血清与0.1%Triton X-100溶液通透细胞封闭处理。将兔抗人TLR2 IgG抗体滴到切片之上，置于4℃湿盒内一夜。取出后清洗，将生物素化山羊抗兔IgG/HRP二抗滴入，二氨基联苯氨显色处理，显色后再以苏木素染色，梯度乙醇处理后脱水，封片。观察组织细胞结构变化，若结构依然完整，且发现棕褐色胞浆，胞核为蓝色阳性；细胞结构完整但胞核为蓝色，未见棕褐色胞浆，则胞核映衬下可见浅蓝色，判定为阴性细胞。 　　检测胎盘组织TLR 4的mRNA。组织标本置于冰盒，Trizol液研磨处理，将胎盘组织总RNA以Trizol一步法提取出来，逆转录得到cDNA，将TLR2、TLR4引物加入并诱导扩增。分别在94℃环境下处理5 min、30 s，72℃环境下处理30 s、54℃环境下处理30 s，72 ℃延伸处理7 min，进行PCR反应。参照2%琼脂糖快速电泳β-actin，凝胶成像系统进行扩增产物分析。 　　1.3 诊断标准 　　参照第8版谢幸主编的《妇产科学》诊断胎膜早破[2]。胎膜组织病理检查出现炎性反应，产前阶段或分娩后24 h后测量体温在37.5 ℃之上，有高于标准值的白细胞计数，恶露有臭味；胎膜病理检测为炎性，即诊断为绒毛膜羊膜炎[3]。 　　1.4 统计方法 　　采用SPSS 16.0软件对该研究的数据进行统计学的分析，计量资料用（x±s）表示，对比应用t检验，P0.05时，差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 TLR4表达情况 　　2组TLR4胎盘表达情况以及胎盘TLR4 mRNA水平差异无统计学意义（P0.05）；研究组血清IL-6、IL-8水平明显高于对照组差异有统计学意义（P0.05）。见表1。 　　2.2 TLR4表达与绒毛膜羊膜炎关联 　　最终检查发现组织绒毛膜羊膜炎23例，TLR4表达水平差异无统计学意义（P0.05），TLR4 mRNA水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者，组织绒毛膜羊膜炎者IL-6、IL-8水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者差异有统计学意义