CRELD1基因在汉族完全型房室间隔缺损患儿心肌组织表达情况初步分析.doc

CRELD1基因在汉族完全型房室间隔缺损患儿心肌组织表达情况初步分析 　　摘要：目的 探讨CRELD1基因在完全型房室间隔缺损（CAVSD）患儿心肌组织中的表达情况。方法 实验组选取CAVSD患儿5例，平均年龄1.2岁；对照组选取室间隔缺损（VSD）患儿5例，平均年龄1.9岁。患儿手术过程中剪取右心房适量心肌组织，应用基因芯片技术对两组标本CRELD1基因表达进行检测，比较两者差异。结果 CRELD1基因在两组病例的表达差异无统计学意义。结论 CRELD1基因在CAVSD与VSD患儿心肌组织中表达情况近似，提示CRELD1基因可能与多种先心病相关，或者CAVSD可能是一种多基因的遗传性疾病。 　　关键词：完全型心内膜垫缺损；CRELD1基因；基因芯片；基因表达 　　中图分类号：R725.4 R259 文献标识码：B 　　doi：10.3969/j.issn.1672-1349.2014.04.019 　　文章编号：1672-1349（2014）04-0419-03 　　完全型房室间隔缺损（complete atrioventricular septal defect，CAVSD），是指左、右房室腔共用一组房室瓣，同时存在相邻的原发性房间隔缺损和室间隔缺损（VSD），占所有先天性心脏病（先心病）的2%左右，约70%的患儿合并先天愚型[1-3]。CAVSD的发生机制尚未明了，心脏的房间隔下部、室间隔上部以及二尖瓣、三尖瓣等组织均由胚胎早期的房室心内膜垫发育而成，任何可以影响心内膜垫发育环节的因素都可能导致CAVSD。随着分子生物医学理论研究与技术的突飞进展，人们逐渐认识到基因结构和表达异常在先心病的发生发展中起着重要的作用。国外研究发现CRELD1（cysteine -rich with EGF-like domain1）基因突变与白种人CAVSD发病相关，国内陈璇等[4，5]也对CRELD1的突变和过表达进行了研究。基因芯片技术[6]是以综合、全面、系统的观点来研究生命现象的一种实验方法，可以从全局理解基因功能和基因之间的相互关系及发病机制。本实验拟采用基因芯片技术，对CRELD1基因在CAVSD患儿心肌表达情况进行研究，探讨CRELD1基因在汉族CAVSD患儿心肌组织中基因表达情况，进一步揭示CAVSD发生、发展的内在分子机制。 　　1 资料与方法 　　1.1 研究对象 选取2012年2月―2012年8月在我科行根治手术的CAVSD患儿10例，分为实验组（CAVSD组）和对照组（VSD组），每组5例，平均年龄分别为1.2岁（8.8个月至1.9岁）和1.9岁（1.0岁～2.7岁）。所有患者均在术中剪取适量右心房切口边缘心肌组织样本。因健康儿童心肌组织无法获取，所以用VSD患儿作为对照组。为使对照组尽可能接近正常儿童，VSD患儿还需满足：①心胸比≤0.6；②VSD缺损≤5mm；③经皮血氧饱和度（SpO2）≥95%；④不合并其他心脏及心外畸形，无先天性心脏病家族史。所有患儿术前均经超声明确诊断并于术中进一步确诊。本实验设计经我院伦理委员会审查通过，患儿监护人均签署知情同意书。 　　1.2 主要试剂、耗材和仪器 试剂：Eukaryotic Hybridization Control Kit（900454，Affymetrix）；Hybridization，Wash and Stain Kit（900720，Affymetrix）；Tough-Spots，Label Dots（9185，USA Scientific）；MessageAmpTM Premier RNA Amplification Kit（1792，Ambion）。耗材：一次性吸头（0.5 μL～10 μL，2 μL～200 μL，100 μL～1 000 μL，Axygen）；一次性薄壁离心管（0.2 mL，1.5 mL，Axygen）；Tough-Spots，Label Dots（9185，USA Scientific）。仪器：超净工作台（CJT-16，北京长城）；微量台式离心机（5415D，Eppendorf）；涡旋混合器（TDX-1，TonDa）；移液器（P-2，P-20，P-200，P-1000，Eppendorf）；离心管架（0.2 mL，0.5 mL～1.5 mL，江苏三和金冠）；冰箱（BCD-223N，美菱）；制冰机（SIM-F124，三洋）；紫外分光光度计（ND-1000，NanoDrop）；凝胶成像仪（GDS-7600，UVP）；恒温金属浴（CHB-202，BIOER）；PCR仪（PTC-225，MJ）；Magnetic Stand-96（AM10027，Ambion）；Hybridization Oven 640（640，Affym