PPARγ激动剂环格列酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用研究.docVIP

PPARγ激动剂环格列酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用研究 　　[摘要]目的 探讨应用过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)激动剂环格列酮减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用及其量效关系。方法70只健康sD大鼠建立心肌缺血再灌注模型后，随机分成假手术组(S组)、缺血再灌注组(I／R组)、环格列酮组1(cigl组)、环格列酮组2(cig2组)、环格列酮组3(cig3组)，每组14只。各组中又随机分为两个亚组。亚组l(6只)在缺血30min、再灌注120min后，以Evans blue、NBT双重染色法测定心肌梗死面积；亚组2(8只)以生物信号分析系统监测记录缺血1、30min，再灌注后1、30、60、90、120min各时间点的左室舒张末压(LVEDP)、左室内压(LVSP)及左室内压发展最大速率(±dp／dt)等血流动力学指标。实验结束时取心肌组织，光镜下观察心肌组织损伤情况，免疫组化法检测心肌组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达，酶联免疫吸附法(ELISA)测定心肌组织细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量，比色法测定心肌组织髓过氧化物酶(MPO)活性。结果与S组比较，I／R组大鼠心肌梗死面积增大，心肌MPO活性升高、中性粒细胞(PMN)浸润严重，心肌细胞因子TNF-α、IL-6含量明显增多，心肌组织高表达ICAM-1(均P0.01)。Cig各组缺血前60min预先应用PPAR-γ激动剂环格列酮可减小心梗范围，改善心脏舒缩功能，降低心肌MPO活性及心肌TNF-a、IL-6含量，并能抑制心肌组织ICAM一1的表达，起到减轻MIRI的作用。结论PPAR-T激动剂环格列酮通过减少PMN浸润，降低心肌促炎细胞因子TNF-a、IL-6的含量，抑制心肌ICAM-1的表达，从而减少心肌缺血再灌注时心肌梗死面积，改善心脏舒缩功能，起到保护心肌的作用。 　　[关键词]过氧化物酶体增殖物激活受体T；激动剂；环格列酮；缺血再灌注损伤 　　[中图分类号]R654.1；R331.31　[文献标识码]A [文章编号]1671―7562(2007)05―0344―06 　　 　　早期再灌注疗法可提高急性心肌梗死(AMI)患者的抢救成功率，并改善预后，但心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的存在影响了部分AMI的再灌注疗效。在MI―RI中，氧自由基、钙超载及中性粒细胞浸润起着决定作用，这些作用与细胞因子密切相关。过氧化物酶体增殖物激活受体- γ(PPAR-γ)属于核激素受体超家族是一类依赖配体激活的转录因子，PPAR-γ除在脂肪组织中有高度表达外，尚存在于活化的内皮细胞、血管平滑肌细胞、单核巨噬细胞以及心肌细胞。在调控脂肪细胞分化、脂质和糖类代谢以及炎症控制等方面具有重要作用。PPAR-γ抗炎作用的分子机制目前尚不清楚，但现有资料表明PPAR-γ受体活化能从转录水平抑制多种炎性介质的基因表达。噻唑烷二酮类(TZDs)抗糖尿病新药(包括罗格列酮、吡格列酮、环格列酮等)，是PPAR-γ的高亲合力配体。Yue等研究表明，罗格列酮具有抗MIRI作用。环格列酮对IR损伤的作用目前尚不清楚，本实验通过建立大鼠心肌在体缺血再灌注模型研究环格列酮对心肌IR的作用，探讨其调控炎症的作用机制及有无明确量效关系。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1．1　试剂 　　环格列酮(ciglitazone)购自德国Cayman公司，其他试剂均为国产分析纯。环格列酮用10％二甲亚砜(DMSO)溶解。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)ELISA试剂盒均购自晶美生物有限公司，细胞间黏附分子-1(ICAM-1)多克隆抗体、链霉亲和素-生物素-过氧化酶复合物(SABC)免疫组织化学试剂盒及DAB显色剂购自武汉博士德公司，髓过氧化物酶(MPO)试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 　　 　　1．2　方法 　　1．2．1　实验分组成年健康SD大鼠70只，雌雄不限，体重220～280g，由东南大学医学院动物实验中心提供。将大鼠随机分成5组，每组14只：(1)假手术组(s组)，手术前1h经颈内静脉推注10％DMSO 1 ml?kg-1；(2)缺血再灌注组(I／R组)，结扎左冠状动脉前降支(LAD)前1h经颈内静脉推注10％DMSO 1ml?kg-1；(3)环格列酮组1(cigl组)，结扎LAD前1h经颈内静脉推注环格列酮0.3mg?kg-1；(4)环格列酮组2(cig2组)，结扎LAD前1h经颈内静脉推注环格列酮1mg?kg-1；(5)环格列酮组3(cig3组)，结扎LAD前1h经颈内静脉推注环格列酮3mg?kg-1。各组内再随机分成两个亚组，亚组1的6只大鼠用于心肌梗死面积测定；亚组2的8只大