ELISA法检测花生油中黄曲霉毒素B1前处理方法改进研究.docVIP

ELISA法检测花生油中黄曲霉毒素B1前处理方法改进研究 　　摘要：目的：对国标GB/T 5009.22-2003中第二法ELISA法测定花生油中黄曲霉毒素B1的样品前处理进行改良。方法：通过分别考察不同浓度的甲醇提取溶剂，分液漏斗萃取的不同振荡力度及频率，pH的调节对免疫反应的影响等。结果：提出了样品处理的最佳组合：使用60%甲醇提取液，分液漏斗萃取最优转速250rpm，振荡时间15min，样品提取物pH调节为6-8。新改进方法下样品加标回收率在80～110%之间。提高了ELISA法检测花生油黄曲霉毒素B1的效率和准确度。 　　关键词：花生油 黄曲霉毒素B1 ELISA 前处理方法 改进 　　中图分类号：R155.5+8 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）16-0025-02 　　Abstract：objective：The ELISA detection method of Aflatoxin B1 in peanut oil should be optimized in national standard（GB/T 5009.22--2003）.Method：Respectively inspect different concentration of methanol extraction solvent，and extract different oscillation intensity and frequency with separating funnel，as well as study the effect of pH adjustment on the immune response.Result：Abstract the best combination of sample processing by using 60% methanol extract，the optional way of separating funnel extraction speech is 250rpm，the oscillation time is 15min，pH adjustment of sample extracts is 6―8.The sample standard addition recovery rate is between 80% and 110% with the new improved method.It helps improve the ELISA’s efficiency and accuracy of detecting Aflatoxin B1 in peanut oil. 　　Key Words：peanut oil；aflatoxin B1；ELISA；pretreatment method；improvement 　　黄曲霉毒素（Alfatoxin，AFT）主要是黄曲霉和寄生曲菌产生的次生代谢产物，具一类化学结构类似的化合物，二氢呋喃香豆素的衍生物。主要包括B1、B2、G1、G2、M1、M2等六种成分[1]。是一种剧毒物质。1993年被卫生组织的癌症研究机构定为1类致癌物，其中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强[2]。植物油中的黄曲霉毒素B1是食品中真菌毒素残留的日常检测指标[3]。我国规定AFB1在花生油的最大限量标准为20μg/kg。目前常见的方法主要有薄层层析法（TLC）、液相色谱法（HPLC）和酶联免疫吸附法（ELISA）[4]。TLC和HPLC法存在样品处理复杂，分析时间长，设备昂贵等缺点，ELISA法因灵敏、简便、快速、成本低廉，适合大批量检测而被广泛应用。AFB1检测的准确度与样品是否完全提取有关。如何提高样品的提取率，本文从样品提取溶剂比例、萃取的振荡力度及频率、pH的控制等因素进行改进研究，减少人工操作，提高检测的准确度。 　　1 材料和方法 　　1.1 仪器和试剂 　　酶标仪（上海三科仪器有限公司）、分液漏斗振荡器（日本ATAGO）、ELISH快速测试盒（山西德丰信成生物科技有限公司）、恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）、分析天平（德国SARTOIUS）、50～300μL八道移液器（Thermo Scientific）。甲醇（天津永大化学试剂有限公司）、石油醚（广州化学试剂厂）均为分析纯。 　　1.2 样品采集 　　实验用10批次花生油，购自市场粮油销售点。 　　1.3 样品提取 　　（1）国标方法。参照国标（GB/T 5009.22-2003）中第二法的样品处理方法，制成样品提取物。 　　（2）对国标方法加以改进。准确称取5g花生油于25mL烧杯中，用20mL石油醚分次将试样转移至125mL分液