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NP比对烟草黑胫病菌生长影响研究 　　摘 要：烟草黑胫病是烟草上的毁灭性病害，主要通过带菌土壤和病残体进行传染。该文通过研究不同N/P比与烟草黑胫病菌生长的关系，找出病菌生长的最适氮磷比例。试验以硝酸钠为氮源，以磷酸二氢钾为磷源，最终得出黑胫病病菌生长的最适氮磷比为3∶2，若氮肥量过多高出磷肥，病菌生长速率也很快，单施钾肥使病菌生长速率减慢。因此，在实际生产中应避免加重病害发生的施肥比例，以控制病害的发生。 　　关键词：烟草；黑胫病病菌；生长；氮磷比 　　中图分类号 S43 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2015）06-79-04 　　烟草黑胫病（Phytophora nicotiana Breda deHaan）是烟草上主要的毁灭性病害之一，最早是1896年由van Breda de Haan发现于印度尼西亚的爪哇[1]，从苗期到成株期均可发病，发病率高，分布范围广，造成的经济损失巨大。人们曾尝试用农业防治、生物防治、化学防治等多种方法控制该病害的危害，但由于该病菌的游动孢子形成速度快且数量大，侵染烟株后潜育期短、发病快，在一个生长季节可以发生多次再侵染，有时还与其他病害混合发生，因而始终无法获得理想的防治效果。烟草对于农药残留、病原菌耐药性以及在质量有特殊的要求[2]，因此，在烟草及烟草制品逐渐向无公害方向发展的趋势下，有必要从多角度探讨控制烟草黑胫病的最佳途径，以寻找新的防治方法。 　　N、P是微生物及烟草生长不可缺少的营养元素，只有确定合理的N、P施肥比例，才能产出优质烟草，同时又不人为地加重病害发生程度。为此，笔者以生态防治为指导思想，从施肥的角度，研究不同N/P比对烟草黑胫病菌生长速率、形态等方面的影响，找出最适于病菌生长的N/P比，从而指导实际生产中合理施肥，并以此来控制烟草黑胫病病害的发生，以减轻烟草种植过程中的损失，提高经济价值。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试材料 　　1.1.1 仪器 显微镜、全自动电热压力蒸汽灭菌箱（YXQ-LS-SⅡ）、立式循环通风干燥箱（101A-2C）、智能人工气候箱（RXZ 106L-A光照度3000）、洁净工作台（SW-OJ-2F）、分析天平等。 　　1.1.2 器具 培养皿、1mL注射器、接种饼、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、棉花、纱布、棉线、酒精灯、接种环、接种针等。 　　1.1.3 药品 硝酸钠、磷酸二氢钾、升汞溶液、酒精、蒸馏水、无菌水、葡萄糖、马铃薯、琼脂等，试剂均为国产分析纯试剂。 　　1.1.4 菌种 采集凤阳烟草所烟田中典型烟草黑胫病株进行分离纯化得到烟草黑胫病菌。 　　1.2 试验设计 　　1.2.1 试验方法 采用随机区组设计二因素试验统计方法[3]。 　　1.2.2 有效含量及各处理设计 根据大田实际情况施肥量5～20kg/667m2[4]以及培养皿面积为0.063 585m2（培养皿半径为4.5cm），试验设计以有效含量为0.15g/皿为标准。由于硝酸钠有效含氮量为16.47%，磷酸二氢钾有效含磷量为22.19%，因此有效氮0.910 7g（硝酸钠）=有效磷0.658 7g（磷酸二氢钾）。根据前期预备试验，不断细化配比，处理Ⅰ、Ⅱ加入单纯氮源和单纯磷源以探索单一施肥对病菌生长的影响，并与氮磷配合施肥作比较；中间（处理Ⅲ～Ⅶ）共5个处理按等比数列分别设置N/P比为6∶1、3∶1、3∶2、3∶4、3∶8，探索最适病菌生长比例，最后一个处理设为空白对照，共8个处理，每个处理重复3次。处理质量设计如下：（1）保证天平所造成的测量误差≤±0.1%；（2）因PDA易凝固，所以将试剂制成试液，各组处理试剂均用10mL无菌水水稀释，且均加入10mL培养基，使得实际配置药液稀释2倍；因此，试剂质量依有效含量质量的2倍（即0.30g/皿）来设计称量质量。8个处理试剂质量如下：Ⅰ：1.821 4g硝酸钠；Ⅱ∶1.3162g磷酸二氢钾；Ⅲ∶硝酸钠（1.561 2g）∶磷酸二氢钾（0.188 0g）=6∶1；Ⅳ：硝酸钠（1.366 0g）∶磷酸二氢钾（0.329 0g）=3∶1；Ⅴ：硝酸钠（1.092 8g）∶磷酸二氢钾（0.536 4g）=3∶2；Ⅵ：硝酸钠（1.040 8g）∶磷酸二氢钾（0.752 0g）=3∶4；Ⅶ：硝酸钠（0.496 8g）∶磷酸二氢钾（0.957 2g）=3∶8；Ⅷ：空白对照（ck）。 　　1.2.3 菌种、接种方法及培养环境 （1）菌种：由大田采黑胫病植株，依据其病原形态[5]，分离出病菌，并连续培养，经显微镜观察符合黑胫病病菌病原形态后，利用柯赫式法则检验，最后得纯种。（2）采用直径为0.5cm的接种饼接大小一致的菌饼置于培养基中央。（3）培养基：由于烟草黑胫病为真菌（疫霉属）病害，因此采用PDA