N乙酰半胱氨酸保护下给药钆二乙三胺五乙酸后慢性肾衰大鼠尿液代谢组学研究.docVIP

N乙酰半胱氨酸保护下给药钆二乙三胺五乙酸后慢性肾衰大鼠尿液代谢组学研究 　　摘要N乙酰半胱氨酸（NAC）有减轻造影剂引发肾损伤的作用，但其作用机制尚未明确。本研究采用基于1H NMR的代谢组学方法，结合正交偏最小二乘法判别分析（OPLSDA），在NAC保护下对慢性肾衰大鼠给药造影剂钆二乙三胺五乙酸（GdDTPA）， 通过分析大鼠尿液中内源性代谢物的变化，研究了NAC对慢性肾衰大鼠的保护机制。结果表明，慢性肾衰大鼠能量代谢、尿素循环等代谢通路发生紊乱。给药GdDTPA后，大鼠尿液中胆碱、N氧三甲胺、邻羟基苯乙酸苯酯、对羟基苯乙酸苯酯、马尿酸、甘氨酸、烟酸、牛磺酸减少，尿囊素增加； 而在NAC保护下相关代谢产物向模型组的恢复，说明NAC对GdDTPA引发的大鼠肠道细菌代谢、肝线粒体代谢、犬尿氨酸代谢紊乱及氧化损伤具有一定修复作用。NAC对尿素循环代谢的改善可能减轻大鼠体内的肾损伤，而其对细胞中谷胱甘肽的补充可能减轻GdDTPA造成的氧化损伤。 　　[KH*3/4D][HTH]关键词代谢组学；核磁共振；慢性肾衰；钆二乙三胺五乙酸；N乙酰半胱氨酸 　　1引 言 　　磁共振成像（Magnetic resonance imaging， MRI）是当前临床诊断中最有力的检测手段之一[1，2]，为提高成像对比度，超过30%的MRI诊断需要使用造影剂。钆造影剂（Gadoliniumbased contrast agents， GBCAs）在人体内具有较高的热力学和动力学稳定性，且易于排出体外，是目前临床应用最广泛的造影剂[3]。2006年， Grobner提出?I源性系统性纤维化（Nephrogenic systemic fibrosis， NSF）的发生可能与肾衰患者在MRI诊断时使用钆造影剂有关[4]，钆造影剂的安全性问题再次得到关注。NSF与钆造影剂的相关性研究有很多，但其发病机理尚未明确，且诊断后尚无有效的治疗方法[5]，因此NSF的早期发现与预防至关重要。 　　N乙酰半胱氨酸（Nacetylcysteine， NAC）是合成谷胱甘肽的前体，最早应用于囊胞性纤维症的治疗，但近年来对其抗氧化性的研究越来越广泛，更值得注意的是NAC有减轻造影剂引发肾损伤的作用[6]，但其作用机制尚未明确。代谢组学[7]是通过考察生物体系受刺激或扰动后代谢产物的变化，系统研究生物体系代谢途径的一种技术，目前广泛应用于药物研发、疾病诊断、食品化学、微生物学、植物生物学及环境监测等领域[8～9]。因此机体在NAC保护下注射钆造影剂后，对其进行代谢组学研究，将对NSF的早期发现与预防起到重要作用。 　　为了研究NAC对钆造影剂引发损伤的保护机制，本研究选择临床应用最广泛的GdDTPA作为研究对象，采用基于1H NMR的代谢组学方法，对NAC保护下给药GdDTPA前后慢性肾衰（Chronic renal failure， CRF） 大鼠尿液中的内源性代谢物进行分析，同时结合单变量分析，找出GdDTPA及NAC影响的潜在特征代谢物，从代谢角度初步阐述了NAC对造影剂引发损伤的保护机制。 　　2实验部分 　　2.1仪器与试剂 　　尿液的1H NMR实验均在AV 600 型核磁共振谱仪（德国布鲁克公司）上进行，质子共振频率为600.13 MHz，采用预饱和方法压制水峰采集信号，采样温度298 K，FID采集次数64，数据点32 K，延迟时间2 s，采样时间2.4773 s，谱宽6613.8 Hz。生化指标在A6 半自动生化分析仪（北京松上技术有限公司）上进行。组织病理学检查在OlympusBX51光学显微镜（日本Olympus公司）上进行。 　　重水（D2O，99.9%氘代，美国剑桥同位素实验室）； 3（三甲基硅基）氘代丙酸钠（TSP，98%氘代）、N乙酰半胱氨酸、腺嘌呤均购于美国SigmaAldrich公司； 马根维显（GdDTPA，0.5 mol/L，德国拜耳先灵医药股份有限公司）； 血清尿素氮、肌酐试剂盒（长春汇力生物技术有限公司）。 　　2.2动物实验 　　取40只成年雄性SD大鼠（吉林大学白求恩医学院动物实验中心），自由摄食饮水，随机分为4组：对照组（Control group， n=8）、慢性肾衰组（CRF group， n=16）、GdDTPA组（CRFGd group， n=8）、NAC组（CRFGdNAC group， n=8）。 　　实验第1～21天，慢性肾衰组、GdDTPA组、NAC组按照剂量200 mg/kg体重灌胃给药腺嘌呤造慢性肾衰（CRF）模型[10]，对照组灌胃蒸馏水；第22～31天，NAC组将饮用水替换为600 mg/L NAC溶液（剂量参考文献[13～14]、大鼠进水量及体重）；第24天，GdDTPA组、NA