七肾汤对羟基脲肾虚大鼠生育力影响实验研究.docVIP

七肾汤对羟基脲肾虚大鼠生育力影响的实验研究 　　【摘要】目的:观察七肾汤对羟基脲肾虚大鼠生育力的影响。方法:用羟基脲造成雌、雄性生殖功能障碍大鼠模型,观察七肾汤对雌性模型大鼠动情周期变化,卵巢、子宫重量;雄性模型大鼠睾丸、附睾重量,精子密度与活率。结果:七肾汤使雌性模型大鼠动情周期较正常大鼠数量增加,子宫重量明显升高;使雄性模型大鼠睾丸、附睾重量、精子密度与活率明显升高,与模型组相比有显著性差异(PO.01)。结论:本实验成功地复制了雌、雄性大鼠生殖功能障碍模型,七肾汤能改善雌、雄性模型大鼠生育力。 　　【关键词】七肾汤;生殖功能障碍;动物模型;实验研究 　　【中图分类号】R285.5【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)16-032-2 　　 　　男女不育不孕病因很多,临床上因肾精不足、肾气亏虚导致的不育不孕尤为常见,七肾汤为温州民间经典验方,以补益肾气、补肾生精为治疗大法,临床疗效肯定[1]。为进一步探讨该方的作用机理,本研究采用羟基脲致雌、雄性大鼠生殖功能障碍的模型来评价七肾汤对生育力的影响。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　3月龄SD(Sprague-Dawley)大鼠雄性、雌性各4O只,体重250±20g。购自温州医学院实验动物中心。七肾汤由菜头肾、红叶对肾、白叶对肾、龙芽肾、荔枝肾、棉花肾、花麦肾组成,由温州医学院制剂室煎制,每mL含生药2.34g。(提取工艺流程:药材洗净,第1次加10倍量水浸泡0.5h,提取2h,滤过;第2次加8倍量水提取2h,滤过,合并2次滤液,真空浓缩,真空度:0.08～0.085mPa;浓缩至1.5倍药材体积时,高速离心,转速15000r/min上清液浓缩至相对体积质量为1.18;喷雾干燥,参数为:温度180℃,出风温度90℃,流量500mL/min。最后得膏8.5kg,得膏率为25.9%(8.5/32.76)。大鼠每种药物的用量根据大鼠用药人鼠换算公式计算而得;羟基脲:济南制药厂产品,规格:0.5克/片。批号:20020。克罗米芬由上海衡山药业有限公司生产,产品批号000401。 　　1.2方法 　　1.2.1分组及造模雄、雌性大鼠随机各取1O只动物作为正常组,其余大鼠予羟基脲片500mg/kg/d灌胃,连续30d,造模成功后,分别将雌、雄动物随机分为3组;模型组,克罗米芬组,七肾汤组。 　　1.2.2给药方法正常组:以生理盐水lmL/100g灌胃,1次/d,连续60d。模型组:造模结束后,以生理盐水lmL/100g灌胃,1次/d,连续30d。克罗米芬组:造模结束后,用克罗米芬4.5mg/kg/d灌胃。雌性动物于每个动情周期的动情前期给药,治疗30d。雄性动物1次/d给药,连续30d。七肾汤组:造模结束后,用七肾汤lmL/100g灌胃,1次/d,连续30d。 　　1.2.3雌性大鼠动情周期观察[2]用生理盐水浸润的棉签轻轻插入动物阴道内,稍转一下后抽出,将取得的阴道分泌物涂在玻璃片上,用5%美蓝溶液染色lOmin,用水轻轻洗去多余染色液,待干,用普通光学显微镜观察脱落细胞,根据脱落细胞变化判定动情周期。 　　1.2.4雌性大鼠子宫指数及卵巢指数测定实验结束时,各组大鼠称体重,断颈处死,立即摘取子宫、左侧卵巢,用滤纸吸干,以分析天平称其湿重,计算各组大鼠子宫、卵巢重量平均值及脏器指数。脏器指数=(脏器重÷体重)×100%。 　　1.2.5雄性大鼠睾丸重量、睾丸指数测定实验结束时,各组大鼠称体重,断颈处死,立即摘取左侧睾丸、附睾,用滤纸吸干,以分析天平称其湿重,观察睾丸、附睾状态,计算各组大鼠睾丸、附睾重量平均值及脏器指数。 　　1.2.6雄性大鼠附睾精子数量、活率测定实验结束时,各组大鼠断颈处死,立即摘取右侧附睾,置于2ml生理盐水中,放置30min,并轻轻振荡,再加入5ml生理盐水稀释,在血小球计数板上计算精子数,以×106/m1表示,在显微镜下观察精子的活动,计算精子活动百分率。 　　1.3统计学处理 　　雌性大鼠动情周期数据用χ2检验进行统计分析,其余数据均以-x士s表示,用T检验进行统计分析。 　　2结果 　　2.1七肾汤对雌性大鼠动情周期的影响模型组大鼠动情周期缺失、不完整、延长(7～9d),动情周期正常(4～5d)大鼠数量减少,与正常组比较有显著性差异(PO.05),克罗米芬组、七肾汤组动情周期正常大鼠数量增加,与模型组比较有显著性差异(PO.05)。见表1 　　表1 各组对雌性大鼠动情周期的影响(x±s) 　　组别 n 动情周期在4～5d的动物数 　　正常组 10 10 　　模型组 10 4△ 　　克罗米芬组 10 7* 　　七肾汤组 10 8* 　　 　　与正常组比较△PO.05,△△PO.0