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一株细菌对蔬菜病原真菌抑菌活性的研究 　　摘要：采用菌丝生长速率法测定分离自实验室的一株细菌对黄瓜灰霉病菌（Botrytis cinerea）、辣椒疫病菌（Phytophthora capsici）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum）的抑菌效果。结果表明，这株细菌对以上3种病原菌均有较好的抑制效果，其中对黄瓜灰霉病菌的抑制效果最好；细菌粗发酵液经一定强度的温度和酸碱处理后仍有一定的抑菌效果，抑菌效果在pH 5.1～9.0之间无显著差异；用胰蛋白酶处理后拮抗活性无明显变化；经硫酸铵处理过的粗发酵液，其上清液与沉淀均具有抑菌活性。 　　关键词：粗发酵液； 黄瓜灰霉病菌（Botrytis cinerea）； 辣椒疫病菌（Phytophthora capsici）；黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum）； 抑菌活性 　　中图分类号：S436.3 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）10-2377-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.10.018 　　植物病害每年给农业生产造成了巨大的损害，化学农药的使用虽可有效地防治各种病害，但是大量连续使用化学农药会引起严重的环境污染和食品安全问题，进而为害人类的健康和生存质量[1]。同时迫于农业无公害、绿色、有机生产的迫切需要以及农产品出口农药残留等方面的限制要求，使研究和开发环境友好的生物农药进行生物防治成为目前世界农药发展的趋势[2]。植物病害生物防治的防治因子包括微生物、抗生素等多种因素。具有生防潜力的微生物有细菌、真菌、放线菌和病毒等种类。这些微生物可通过与病原菌竞争生态位和营养物质、分泌抗菌物质、寄生病原菌等多种生防机制实现对植物病害的防治[3]。灰霉病是农作物的主要病害之一，如何高效安全地进行灰霉病的防治是长期以来有待解决的难题。筛选对灰霉病菌有拮抗作用的微生物，从中开发出新型、高效、无毒天然农用杀菌剂是防治灰霉病的重要途径。安瑞平[4]采用组织分离法，从黄瓜各器官（根、茎、叶）中得到内生细菌173株。通过平板对峙培养筛选出8株对黄瓜灰霉病菌具有较强拮抗作用的细菌，再对这8株菌发酵滤液的抑菌活性进行测定，选出抑菌效果最好的2个菌株B12和B13，抑制率分别为84.0%和81.8%[4]。张兴锋等[5]分离了红树植物（木榄）体内的解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）CⅢ-1菌株，对多种病原菌具有较强的抑制作用，该菌产生的抗菌蛋白液对疫霉菌等植物病原菌具有较强的拮抗作用，同时发现该抗菌蛋白对热不稳定。 　　本研究针对目前对黄瓜灰霉病、辣椒疫霉病、黄瓜枯萎病尚无高效生防菌株的问题，采用生长速率法测定细菌MSL2#对以上3种病原菌是否具有生防效果。同时研究了经不同温度和酸碱处理后，MSL2#菌发酵液对这三种蔬菜病原菌抑菌活性的变化，以期得到具有高效生防潜力的菌株。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 供试菌株 黄瓜灰霉病菌（Botrytis cinerea）、辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporumf），细菌MSL2#（拮抗菌，待鉴定）均由郑州轻工业学院实验室分离提供。 　　1.1.2 培养基 PDA培养基：马铃薯200 g、琼脂15 g、葡萄糖20 g、去离子水1 000 mL。用于病原真菌的活化及培养。牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏0.5 g、蛋白胨1 g、氯化钠0.5 g、琼脂2 g、去离子水1 000 mL。用于生防细菌的活化及培养。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细菌活化 用接种环从试管中挑取MSL2#，接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，37 ℃培养3～4 d。 　　1.2.2 发酵液的制备 取在斜面中活化好的MSL2#，注入2 mL无菌水，配成菌悬液，摇匀后用移液器各移取1 mL接种至装有150 mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的三角瓶中，于37 ℃摇床培养3 d。 　　将发酵好的发酵液于高速冷冻离心机中12 000 r/min离心10 min，收集上清液于250 mL无菌三角瓶中，细菌过滤器对离心上清液进行过滤，收集滤液于250 mL无菌三角瓶中，即为粗发酵液，置于4 ℃冰箱中保存备用。 　　1.2.3 对病原真菌拮抗效果的测定 MSL2#对黄瓜灰霉病、辣椒疫霉病、黄瓜枯萎病3种病原真菌拮抗效果的测定采用抑制菌生长速率法，重复3次，用直径为0.6 cm的打孔器在培养好的供试菌落边缘切下菌饼，用接种环反接于培养皿内，28 ℃培养4～5 d，用十字交叉法测量菌落扩展直径，每个处理重复3次，计算抑菌率[6]。 　　1.2.4 热处理对粗发酵液