不同剂量凯西莱治疗肝豆状核变性模型鼠实验研究.docVIP

不同剂量凯西莱治疗肝豆状核变性模型鼠的实验研究 　　摘要：目的　探讨不同剂量凯西莱对肝豆状核变性模型鼠铜代谢变化的影响。方法 用铜负荷饮食法复制肝豆状核变性疾病动物模型，将模型大鼠分为3个治疗组与1个模型组，3个治疗组分别给予50 mg／(kg?d)、100mg／(kg?d)、200 mg／(kg?d)凯西莱(静脉输注)。观察各组大鼠谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白、白蛋白、肝铜、24h尿铜变化情况。并观察病死率及生长发育情况。结果　各治疗组病死率明显降低，100mg／kg组、200 mg／(kg?d)组肝铜含量较模型组明显降低(P0．05或P0．01)，24 h尿铜明显升高。结论　凯西莱能降低铜负荷大鼠肝铜含量，降低其病死率。 　　关键词：凯西莱；铜负荷模型；肝豆状核变性：肝铜 　　中图分类号：R589 R285．5 　　文献标识码：A 　　文章编号：1672－1349(2007)06―0508―02 　　凯西莱又名硫普罗宁(tiopronin，MPO)，是一种新型的含巯基甘氨酸类药物，其化学名为N－(2巯基丙酰基)甘氨酸，凯西莱首先作为改善肝功能药物应用于临床，后义发现有络合重金属的作用，国外长期使用证实该药具有疗效确切、安全可靠等特点。凯西莱可能对铜代谢障碍疾病肝豆状核变性(HLD)的过量铜沉积有治疗作用。本实验探讨了不同剂量凯西莱对肝豆状核变性模型鼠铜代谢变化的影响，获得了预期的效果。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1．1动物　纯系健康雄性Wistar大鼠60只，体重220g～280g，购于安徽医学科学研究所实验动物中心。动物房为普通级饲养室，实验前先适应性饲养1周。 　　1．2药品、试剂与仪器凯西莱：新谊药业股份有限公司生产，规格：0．1g，每盒12片，批准文号：国药准字谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白、白蛋白测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。去离子水：安徽大东方药业提供。硫酸铜、硝酸：优级纯，合肥大药房提供。原子吸收分光光度计：北京WFX－1A型原子吸收分光光度计。721型分光光度计：上海第三分析仪器厂。 　　1．3动物分组与治疗　第1步：取Wistar雄性大鼠60只，体重为220 g～280 g，1周后开始造模。随机取10只作为正常组，另50只喂饲含硫酸铜1g／kg的粉状饲料和0．185％硫酸铜的去离子水造模4周(铜负荷饮食)。第2步：由于在第1步造模过程中造模组有8只大鼠死亡，故第2步给予如下分组与治疗：正常组喂普通饲料，其余继续给予铜负荷饮食。正常组10只；模型组12只；50 mg／kg组10只，静脉输注凯西莱50mg／(kg?d)；100 mg／kg组10只，静脉输注凯西莱100 mg／(kg?d)；200 mg／kg组10只，静脉输注凯西莱200 mg／(kg?d)；第8周结束，在禁食18h后处死大鼠，取血测ALT、AST、总蛋白、白蛋白、肝组织标本测肝铜。大鼠处死前5d置代谢笼连续留取3天的24 h尿液，做24h尿铜检查。 　　1．4观察指标与测定方法　实验动物一般情况观察：实验动物的饮食、毛色、活动度、排泄物、生长情况。血ALT、AST、总蛋白、白蛋白测定，按试剂盒说明书操作；肝组织标本先用生理盐水反复洗净，再用干净滤纸吸干并秤取湿重500mg，用浓硝酸(分析纯)10mL低温加热进行消化，等组织完全溶解至黄色澄清透明后，采用原子吸收分光光度计测量、火焰法测定铜含量。24h尿铜测定：单只置于代谢笼，收集24h尿液，摇匀后，用量筒准确量出尿液体积，并记录总毫升数，测定时取2 mL尿液加0．1 mL　H2SO4混匀待测。采用原子吸收分光光度计测量、火焰法测定。 　　1．5统计学处理　计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用SPESS 11．0软件包，不同组间两两比较时用t检验。 　　 　　2结果 　　 　　2．1 实验动物观察　在造模过程中大鼠对饲料的消耗及饮水量明显减少，约为正常组的1／2，活动减少，毛色欠光泽，在前4周造模过程中造模组相继有8只鼠死亡，正常组无死亡。在后4周模型组又死亡5只，50mg／kg组死亡2只，200 mg／kg组死亡2只，100 mg／kg组无死亡且状态较为活跃，毛色有光泽，与正常组无二，采食及饮水量明显增加。造模及治疗过程中未发现大鼠腹泻、溶血、黄疸、贫血等表现。治疗前后各组间体重差异并不明显，各组内大鼠体重均有明显增长，各组增长幅度无明显差异。 　　2．2各组动物血清ALT、AST总蛋白、白蛋白变化情况　治疗后血清ALT、AST模型组较正常组升高(P0．05)，ALT模型组与凯西莱各组比较无明显差异；100mg／kg组、200mg／kg组AST较模型组、50mg／