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肝糖原提取与鉴定实验方法改进探索 　　摘要： “肝糖原的提取与鉴定”实验，由于按教材操作方法经常出现实验结果不理想，为此，笔者对唐微主编的《生物化学与免疫学实验教程》中“肝糖原的提取与鉴定”实验的操作方法作了探索性的改进，即在酸碱中和步骤里排除糖原水解过程中挥发的部分盐酸，舍弃滴管而选用吸量管吸取氢氧化钠溶液。教学实践证明，改进后的操作方法切实可行，效果明显。 　　Abstract： Extraction and identification of glycogen experiment result often is not satisfactory because of according to teaching materials operation methods， therefore， the author makes exploratory improvement for the operation methods of Extraction and identification of glycogen experiment in Journal of Biochemistry and Immunology Tutorial written by TANG Wei， which excluding volatile part hydrochloric acid of glycogen hydrolysis process in acid neutralization step， discarding dropper and selecting pipettes to draw sodium hydroxide solution. Teaching Practice has proved that the improved operation method is practical and has obvious effects. 　　关键词： 浓盐酸的挥发性；中和反应；操作方法；改进 　　Key words： volatility of concentrated hydrochloric acid；neutralization reaction；operation methods；improvement 　　中图分类号：TQ016.1 文献标识码：A 文章编号：1006-4311（2014）10-0307-02 　　0 引言 　　对于西医临床专业学生来说，“生物化学”是一门必修的，主干专业基础课，为了配合《生物化学》理论教学和培养学生创新动手能力，进而开设“生物化学实验”，这是一门专业基础性实验课。本校选用唐微主编的《生物化学与免疫学实验教程》作为西医临床专业“生物化学实验”教材，其中实验二十三“肝糖原的提取与鉴定”属于创新性实验。在教学过程中笔者发现：进行该实验时，没有明确操作方法的实验条件，导致实验结果不理想，在试验过程中，学生对实验结果充满疑惑，甚至在试验过程中，因反复滴定酸碱中和，进而导致耗时过长，最终没有按时完成实验。针对这些问题，对该实验中的操作方法，笔者进行了一些探索的改进，同时取得了良好的教学效果。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 猪肝，离心机，组织匀浆机，刻度吸量管，5%三氯醋酸溶液，95%乙醇，0.9% NaCl溶液，碘试剂（碘l00mg和K1 200mg溶于50mL蒸馏水中），37.5%浓HCl，50%NaOH，精密pH试纸，班氏试剂称取柠檬酸钠（C5H5Na3O7·5H2O，294.10）173g和无水碳酸钠（Na2C03，105.99）100g溶于蒸馏水800mL中，加热促溶。冷却，慢慢倾人17.3%硫酸铜（CuSO4·5H2O，249.68）l00mL，边加边摇。再加蒸馏水至1000mL，混匀，如混浊可过滤取滤液。 　　1.2 实验方法 在以往本实验教学中，指导学生操作糖原水解后的酸碱中和反应方法是：用滴管吸取50%NaOH滴定含有浓盐酸的糖原水解液[1]。但在实际操作过程中，由于糖原水解过程需要加热且浓盐酸本身具有挥发性的原因会挥发一部分盐酸，加上滴管滴定时有残留或口径大小差异等原因，使得滴入的NaOH含量与设定值不符，两者都会造成中和后的溶液偏酸或偏碱，从而影响后面的呈色反应效果。鉴于此，笔者将方法改进如下：在糖原水解冷却结束时刻用精密pH试纸测出此时溶液的pH值，算出滴定此时溶液中盐酸所需50%NaOH体积数值，用刻度吸量管吸取所需NaOH量进行中和滴定。 　　实验步骤如下：猪肝约1g剪碎置入组织匀浆机→加5%三氯醋酸4mL→制成肝匀浆→全部转入离心管中，离心3分钟（4000r/min）→弃去沉淀，上清→加5mL95%乙醇，混匀静置10分钟→离心5分钟