一例副猪嗜血杆菌分离培养及药敏试验.docVIP

一例副猪嗜血杆菌的分离培养及药敏试验 　　摘要：副猪嗜血杆菌（HPS）主要危害保育猪群，引发以脑膜炎、关节炎、多发性浆膜炎等为主要特征的传染病，猪群一旦发病，病死率较高，给养猪业造成重大经济损失。从疑似发生副猪嗜血杆菌病的河南濮阳某猪场无菌采集病料，并进行触片镜检、分离培养、生化试验。结果成功分离到了副猪嗜血杆菌，药敏试验显示，分离菌株对氟苯尼考、泰妙菌素、氟甲砜霉素、头孢菌素、丁胺卡那霉素、头孢噻肟高敏，对红霉素、克林霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、链霉素、土霉素低敏。根据药敏试验结果，对发病猪群进行治疗，取得了良好的治疗效果。 　　关键词：猪；副猪嗜血杆菌；分离培养；药敏试验 　　中图分类号：S858.28 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2017）010-0013-02 　　副猪嗜血杆菌（HPS）是一种多形态、非溶血性、不运动、NAD依赖型、革兰氏阴性细小杆菌，属于巴斯德杆菌科嗜血杆菌属。副猪嗜血杆菌只感染猪，有很强的宿主特异性，可以影响2周龄到4月龄的青年猪，主要在断奶后保育舍阶段发病，感染高峰通常见于保育期的4～6周，发病率一般在10%～15%，严重时病死率可达 50%[1]。该菌在特定的条件下，可以侵入猪机体，引发一种以脑膜炎、关节炎、多发性浆膜炎等为主要特征的传染病，又称为猪革拉斯氏病（Glasser′s disease）[2]，主要临床症状表现为咳嗽、呼吸困难、消瘦、跛行和被毛粗乱；主要剖检病变表现为纤维素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎和脑膜炎等[3]。目前，根据免疫扩散试验，确定该菌有15个血清型，全国各地流行的血清型不完全相同。由于副猪嗜血杆菌血清型多、产生耐药性快，致使临床疫苗免疫和用药效果不理想，给该病的预防和治疗带来很大的困难[4]。相对于传统用药，分离鉴定该菌并进行药敏试验分析是比较有效的治疗方法。 　　2016年4月11日，濮阳地区某中小规模猪场出现25头47日龄的猪发病，根据患病猪流行病学调查情况、临床症状和剖检变化，疑似副猪嗜血杆菌病。通过无菌采集病猪典型病变组织进行细菌分离培养、镜检和生化鉴定等实验室诊断技术，最终确认分离到的细菌为副猪嗜血杆菌，确诊该猪场所患猪病为副猪嗜血杆菌病。对分离到的细菌进行药敏试验，并根据药敏试验结果进行了治疗，取得了良好的治疗效果，现将其报告如下。 　　1 材料 　　1.1 病料 　　在无菌操作条件下取疑似病猪的肺脏、胸膜、胸腹腔积水、心包积液、心血、关节液。 　　1.2 培养基 　　胰蛋白大豆琼脂（TSA）、胰蛋白大豆肉汤（TSB）培养基购自英国OXOID公司。 　　1.3 试剂 　　新生牛血清、辅酶I（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD+）购自长沙虹宇生物科技有限公司。 　　1.4 细菌染色液 　　革兰氏染色液购自北京陆桥生物技术有限公司。 　　1.5 生化试验试剂 　　氧化酶、甘露醇、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、核糖、脲酶和伯胶糖等均购自长沙金标生物有限公司。 　　1.6 药敏纸片 　　氟苯尼考、泰妙菌素、头孢菌素、丁胺卡那霉素、氟甲砜霉素、头孢噻肟、红霉素、克林霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、链霉素、土霉素均购自长沙虹宇生物科技有限公司。 　　2 方法与结果 　　2.1 病理变化 　　剖检病死猪，发现胸腔内有大量淡红色液体、纤维素性渗出物。肺脏呈纤维素性胸膜肺炎， 肺肿大呈暗紫红色，表面覆有纤维素性渗出物。支气管内有淡红色泡沫样渗出物。心包积液。腹腔内有大量透明黄褐色渗出液， 有的呈胶胨状凝块。全身淋巴结肿大，暗红色。关节肿大，有浆液纤维素性化脓性炎症。 　　2.2 触片镜检 　　取发病猪的肺组织、心血、胸水和腹膜面涂片，革兰氏染色，镜检可见革兰氏阴性的细小杆菌，个别两极球杆状革兰氏阴性菌。 　　2.3 细菌分离培养 　　无菌取发病猪的肺脏、腹膜、胸水和心血划线接种于含NAD+和5%小牛血清的TSA平板，置37 ℃5%CO2培养箱培养24～48 h[5]，出现无色、透明、湿润、光滑、边缘整齐的针头大小菌落，镜检可见大小不一、形态细长、丝状的革兰氏阴性杆菌。接种无NAD的TSA平板上不生长。而后挑取单个菌落，接种到含有NAD+的TSB培养基中进行纯培养。 　　2.4 生化试验 　　挑取纯化菌落接种于氧化酶、甘露醇、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、核糖、脲酶和伯胶糖等生化鉴定管中，同时加入0.01%的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）5 μL，置于37 ℃5%的CO2培养箱培养48 h，观察结果见表1。生化试验结果表明，疑似纯培养菌符合副猪嗜血杆菌的生化特性。 　　2.5 药敏试验 　　将细菌TSB纯培养物吸取200 μL均匀涂布于TSA平板上，采用纸片法进行药敏试验，置37 ℃