不同室温下EDTA修复时间对P504S蛋白在前列腺癌组织中表达影响研究.docVIP

不同室温下EDTA修复时间对P504S蛋白在前列腺癌组织中表达的影响研究 　　【摘要】 目的 探讨不同室温下EDTA修复时间对P504S蛋白在前列腺癌组织中表达的影响情况。方法 分析30例前列腺癌患者临床资料， 将病理标本分别在3种不同室温下进行抗原修复， 分别每例标本切9张片。观察不同室温下进行抗原修复显色反应和背景显色情况。结果 室温8～10℃抗原修复30 min， 室温18～20℃抗原修复20、25 min显色反应的准确率最高， 背景显色效果最好， P0.05， 差异均有统计学意义。结论 室温8～10℃抗原修复30 min， 18～20℃抗原修复20、25 min对P504S蛋白在前列腺癌组织中表达显色效果最好， 为病理诊断提供准确依据， 值得临床推广应用。 　　【关键词】 不同室温；EDTA修复时间；P504S蛋白；前列腺癌；表达；影响 　　前列腺癌属于典型老年性疾病， 据美国癌症协会统计， 70%以上的前列腺癌患者年龄65岁， 其中60～79岁的发病率达0.17%， 我国发病年龄亦然[1]。目前， 已公认前列腺癌的发病与高脂肪饮食有关， 导致前列腺癌危险因素和保护因素的失衡， 在低危人群出现发病率明显增高趋势， 而且由于前列腺癌进展缓慢， 致病因素的刺激往往在数十年后才能表现为发病率的增高， 在我国的发病率也存在上升趋势[2]。本研究通过3种不同室内温度及3种不同的抗原修复时间对30例前列腺癌组织标本进行修复检测比较， 探寻出适合广东地区的最佳抗原修复时间， 现将研究结果报告如下。 　　1 资料与方法 　　1. 1 一般资料 选取广东省中山市中医院病理科2012年3月～2014年5月收治的前列腺癌患者30例临床资料进行分析， 选取患者的存档蜡块标本进行观察， 其中手术切除标本16例， 经尿道电切标本10例， 穿刺活检标本4例。将病理标本分别在3种不同室温（8～10℃、18～20℃、28～30℃）下进行抗原修复， 分别每例标本切9张片。将每例的9张切片分为九组， 在相同室温下分别进行20、25、30 min的抗原修复。 　　1. 2 试剂与方法 　　1. 2. 1 试剂 ①选择福州迈新生物技术开发有限公司的产品：EDTA抗原修复液（pH=9.0）、兔抗人α-甲酰基辅酶A消旋酶（P504S）、快捷型酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物、DAB缓冲液、DAB底物、DAB色原、PBS磷酸盐缓冲液。②上海宏兹实业有限公司生产的环保透明剂、广东汕头西陇化工有限公司生产的酒精。 　　1. 2. 2 方法 石蜡组织切片脱蜡至水， 并浸泡于水中待用， 取适量已稀释成工作液的EDTA抗原修复液（按1：50比例）于高压锅中， 将高压锅置于电磁炉上， 大功率加热至沸腾后将功率调至最小， 将置于耐高温架上的切片放进已沸腾的修复液中， 盖上锅盖， 继续加热至喷气1 min后将不锈钢锅离开电磁炉， 并用流水在高压锅外壁分别冲冼20、25、30 min （时间均从切片放进修复液中计起）， 冷却至室温后取出切片， 流水冲洗3 min， 在离组织3 mm处用油笔画圈后用PBS冲冼3次， 3 min/次， 滴加新鲜配制DAB显色液100 μl， 室温下染色3 min， 自来水冲洗， 苏木素复染， 自来水冲洗10 min返蓝， 再经酒精梯度脱水， CR3透明， 中性树胶封固， 镜下观察阳性细胞数量及染色强度， 并进行对比、分析、记录。 　　1. 3 结果判定标准 以胞浆内出现棕黄色或者棕色颗粒表示阳性， 阴性表示为（-）、弱阳性表示为（+）、阳性表示为（++）。背景清晰表示为（-）、轻微的背景染色表示为（+）。 　　1. 4 观察指标 观察在室温8～10℃抗原修复20、25、30 min， 室温18～20℃抗原修复20、25、30 min， 室温28～30℃抗原修复20、25、30 min显色反应和背景显色情况。 　　1. 5 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件进行统计分析。计数资料采用χ2检验。P0.05表示差异有统计学意义。 　　2 结果 　　不同室温下EDTA修复时间下P504S蛋白在前列腺癌组织中表达情况：室温8～10℃抗原修复30 min， 室温18～20℃抗原修复20、25 min显色反应的准确率最高， 背景显色效果最好， 差异均有统计学意义（P0.05）。见表1。 　　3 讨论 　　前列腺癌（PCa）是男性泌尿生殖系肿瘤中最为常见的一种， 属于人类特有的疾病[3]。有资料显示[4]， 在欧美前列腺癌死亡比例较高， 在北欧国家前列腺癌的发病率占男性肿瘤的首位， 在美国是男性癌症死亡率的第二位， 仅低于肺癌。前列腺癌临床诊断依据主要是肿瘤细胞的特异性、组织结构和浸润方式等， 一些前列腺癌往往在光镜下不容易找到充足的诊