乐果和铜砷对费氏弧菌联合毒性效应研究.docVIP

乐果和铜、砷(Ⅲ)对费氏弧菌的联合毒性效应研究 　　摘 要：在实验室条件下，研究3种污染物质铜（Cu）、砷（As）和农药乐果（Dimethoate）对费氏弧菌（V. fischeri）的单一毒性和联合毒性效应。单一毒性实验结果表明，3种污染物质对费氏弧菌的毒性大小为CuAs（Ⅲ）乐果。3种物质对费氏弧菌的15min半数致死浓度（Median effective concentration，EC50）分别为2.04、5.23、523.99mg/L。利用毒性单位（Toxicity unit， TU）法、相加指数（Additive index， AI）法和混合毒性指数（Mixtures toxicity index， MTI）法对混合样本进行了定性评价，结果表明，在二元混合体系中，不同毒性单位的乐果与Cu均表现为协同作用，不同毒性单位的乐果与As（Ⅲ）部分表现为拮抗作用。乐果-Cu-As（Ⅲ）的三元混合体系的联合作用表现为部分相加作用和协同作用。 　　关键词：乐果；铜；砷；联合毒性；费氏弧菌 　　当今世界，在农业和工业生产中，重金属和有机物质被大量使用。随着诸如Cu、As等有毒重金属和农用化学品如有机农药、人工饲料和化肥先后或同时进入自然环境，并通过各种途径直接或间接进入水体，彼此产生联合作用，从而对水体环境造成复合污染[1]。发光细菌是一种能够发出可见光的细菌，利用其发光强度的变化，可以反映环境中的综合毒性[2]。发光细菌毒性检测法具有操作简单、反应迅速、结果灵敏、稳定性高等优点，故被广泛地运用到环境中污染物质的毒性检测领域。目前利用发光菌作为受试生物对重金属和有机磷农药联合毒性的研究内容涉及较少，深度较浅。而由于对重金属和有机磷农药的混合体系联合作用效应未知，导致重金属和有机磷农药的混合物已经对环境造成了严重的破坏，因此，进行重金属和有机农药的联合毒性效应研究刻不容缓。 　　本实验使用费氏弧菌作为受试生物，使用三种评价方法评价基于乐果和铜、砷（Ⅲ）的联合毒性效应，为环境影响评估提供基础数据。 　　1 材料与方法 　　1.1仪器与试剂 　　GloMax20/20型生物发光检测仪；高压灭菌锅；恒温培养箱；恒温振荡箱；费氏弧菌（V. fischeri）?龈煞酃河诒本┍跛晒庾蛹际豕煞萦邢薰?司；乐果，有效成分含量为50%；硫酸铜（CuSO4?5H2O），分析纯；三氧化二砷（As2O3），分析纯。 　　1.2实验方法 　　1.2.1单一毒性的测定 　　配制不同浓度的待测液。每个浓度设置一个空白对照组和三个平行实验组，按菌液体积：待测溶液体积=1：9，测量15min后，费氏弧菌的发光强度，并计算其发光抑制率。 　　1.2.2联合毒性的测定 　　采用等毒性浓度配比法[3]，以乐果+Cu、乐果+As（Ⅲ）毒性单位比分别为1：1、1：2、2：1的比例设置质量浓度梯度，以乐果+Cu+As（Ⅲ）毒性单位比分别为1：1：1、2：1：1、1：2：1、1：1：2的比例设置浓度梯度，测定混合物对费氏弧菌的联合毒性效应。 　　1.3联合毒性的评价方法 　　1.3.1毒性单位（TU）法 　　式中：Ci为造成生物半致死时混合物中的i组分的浓度；EC50，i为单一受试样本i的EC50值。TUi为混合污染物中的i组分的毒性单位，TUi，max为混合物中各组分的毒性单位最大值。利用M与M0来评价联合毒性效应类型：M=1时为简单相加作用；1M0时为拮抗作用。 　　1.3.2相加指数（AI）法 　　当M≤1时，AI=1/M-1；当M1时，AI=1-M。AI法的评价标准为：当AI=0时，为相加作用；当AI0时，为协同作用。 　　1.3.3混合毒性指数（MTI）法 　　MTI=1-lgM/lgM0 　　基于MTI值的评价标准为：当MTI=1时，为简单相加作用；当MTI1时，为协同作用；当0MTI1时，为部分相加作用；当MTI=0时，为独立作用。 　　2 结果与讨论 　　作用15min时，乐果、Cu和As（Ⅲ）对费氏弧菌的EC50分别为523.99、2.04、5.23mg/L。 　　2.1二元联合毒性效应研究 　　乐果分别与Cu、As（Ⅲ）对费氏弧菌的二元联合毒性效应实验结果如表1所示。 　　分别使用TU法、AI法和MTI法评价受试物的联合毒性，结果如表2、表3所示。 　　在乐果-Cu的二元混合体系中，三种评价方法均表现为协同作用。由表2可知，随着Cu的比例的提高，M值递减，AI值递增，表明在乐果-Cu的混合体系中，Cu浓度越高，协同作用程度越大。其原因可能是乐果溶液呈弱酸性，会在一定范围内降低混合溶液的pH，故导致Cu2+的解析量增大。另外，Cu2+在混合物中所占比例大、浓度高时，会导致膜脂质过氧化，细胞膜的通透性上升[4]