亚精胺对小菜蛾幼虫生长及保护酶活力影响.docVIP

亚精胺对小菜蛾幼虫生长及保护酶活力的影响 　　摘要　在实验室条件下测定经亚精胺处理后，对小菜蛾Plutdla xylostella L.3龄幼虫取食量、存活、羽化率、蛹重及保护酶活力的影响。结果表明，亚精胺对小菜蛾幼虫的取食量、存活、羽化及保护酶活力均有明显的影响。经过亚精胺处理后的大部分时间段，3龄幼虫的取食量、存活率、化蛹率及体内SOD和POD活力均明显高于蒸馏水对照；对处理后24和36 h CAT活力也有明显的促进作用；但亚精胺对其蛹重、蛹的羽化率却无明显的影响。 　　关键词　小菜蛾，亚精胺，取食量，保护酶 　　 　　多胺是生物体内普遍存在的具有生物活性的一类低分子量的含氮碱类，是精氨酸(Arg)代谢过程中产生的一类低分子胺，主要有腐胺(put)、亚精胺(spd)与精胺(spm)等。许多研究表明，多胺对生物大分子的合成、细胞的生长、分化及蛋白质的生物合成有重要的调节作用。目前的研究表明，这些普遍存在的多胺对昆虫具有多种生理功能，如对卵黄发生、胚胎发育、激素代谢、行为选择、生长和变态，以及繁殖等都有影响。对植物的研究也表明，多胺是重要的信使分子，参与包括生长发育、抗逆性等在内的几乎所有的生理生化过程，如受到病原菌侵染后，植物中多胺合成量增加；外源精胺可通过活性氧激活植物防御基因和超敏反应，从而获得抗性。 　　作者前期的研究结果表明，经腐胺处理后，小菜蛾PluteUa xylostella L.3龄幼虫的取食量、存活率、化蛹率及体内SOD和POD活力均明显高于对照。这表明，腐胺与小菜的生长发育及抗逆性有一定关系。但对于另一类常见的多胺――亚精胺与昆虫的生长发育或抗逆性是否相关，则未见报道。为此，本试验以小菜蛾为对象，研究亚精胺对小菜蛾幼虫的取食、存活及化蛹等的影响；在此基础上，分析与昆虫耐药抗逆能力密切相关保护酶的活力，以期阐明亚精胺对小菜蛾生长特别是对其幼虫存活的影响是否与其保护酶活力的变化相关。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1　供试昆虫与试剂 　　小菜蛾为本实验室长期饲养的敏感品系，于23～25℃、光周期16L：8D，相对湿度60％～70％的条件下饲养。取3龄幼虫供试验。亚精胺(spd)为Sigma公司产品，纯度99％。 　　 　　1.2　处理方法 　　取面积相同的新鲜甘蓝(Brassica oleracea) 　　将叶片浸于0.05％，0.1％和0.5％的亚精胺溶液中1 min，叶片晾干后接3龄小菜蛾幼虫，以蒸馏水处理作对照。每处理30头，重复3次。 　　于12，24，36，48和60 h通过坐标纸面积法记录小菜蛾幼虫的取食量，记录不同处理的幼虫死亡率、化蛹率、蛹重、羽化率。并于相同时段取样，保存于－70℃备用。 　　 　　1.3　酶液制备 　　参照李周直等的方法，将供试3龄幼虫置于预冷的玻璃匀浆器中，加入1 mL的0.05mol／L PBS缓冲液(pH 7.0，含1％的聚乙烯吡咯烷酮)，冰浴匀浆。匀浆液置于冷冻离心机中于2℃、15 000 r／min离心20 min，取上清液作为酶源。 　　 　　1.4　酶活力测定 　　保护酶活力的测定参照李周直等的方法。超氧化物岐化酶(sOD)活性测定方法：3.6 mL反应液中含0.05 mol／L PBS缓冲液(pH7.0)、13.37 mmol／L蛋氨酸、77.12 tzmol／L氮蓝四唑(NBT)、0.1 mmol／乙二胺四乙酸(EDTA)和50uL酶液，最后加0.2 mmol／L核黄素0.4mL。置于4 000 lux光照条件下进行光化学反应，反应温度25℃，15 min后用黑暗终止反应，立即在560 nm下比色。1个酶活单位(u)为相当于引起3.6 mL反应液达到50％抑制所需的酶量。 　　过氧化物酶(POD)活性测定方法：5.2 ml,反应液中含0.2 mol／L PBS缓冲液(pH 6.0)、0.12 mol／L、愈创木酚2 mL、0.1mol／H2O2，1mL和0.2mL酶液，作用10min，在470 nm下比色。 　　过氧化氢酶(CAT)活性测定方法：反应混合液中包括0.2 mol／L pH 7.0的PBS缓冲液2.5 mL，0.1 mol／L的H2O21.0 mL及蒸馏水6.5mL，再加入酶液0.2 mL，上述溶液在烧杯中混匀，反应2min，加2 mL 10％H2SO4终止反应。用2 mmol／L KMnO４滴定剩余H2O2，根据H2O2的消耗量计算CAT活性。 　　 　　 　　 　　1.5　数据处理 　　统计分析文中数据均以平均数±标准误表示，方差分析采用Duncan新复极差检验法，以DPS软件计算所得。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2.1　亚精胺对小菜蛾幼虫取食量的影响