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伤害对巴西橡胶树胶乳中磷脂酶A2的影响 　　摘要:以巴西橡胶树(Hevea brasiliensis Mull. Arg.)无性系PR107和热研7-33-97为试验对象，研究机械伤害#65380;外源茉莉酸及乙烯(利)等条件对胶乳C-乳清中磷脂酶A2的影响。结果表明，伤害和外源茉莉酸及乙烯(利)对磷脂酶A2均有诱导作用。其中机械伤害的诱导效应最为明显，外源茉莉酸最适诱导浓度为0.08%，磷脂酶A2活性随着外源乙烯刺激剂量的增加而增强。伤害信号能在伤害早期较明显地诱导磷脂酶A2的活性。 　　关键词:巴西橡胶树;磷脂酶A2;伤害;茉莉酸;乙烯(利) 　　中图分类号:S794.1;Q556+.4;S763.19 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2008)08-0923-04 　　 　　磷脂酶A2(phospholipase A2，EC3.1.1.4，简称PLA2)在生物体内广泛分布。按其来源可分为胞外分泌型PLA2(sPLA2)#65380;胞质Ca2+依赖型PLA2(cPLA2)和Ca2+不依赖型PLA2(iPLA2)3种类型[1，2]。植物体中PLA2催化细胞膜上磷脂的第2位酯酰键水解，生成溶血磷脂及游离的亚麻酸(linolenic acid)或亚油酸(linolic acid)。亚麻酸是茉莉酸(jasmonic acid，JA)和其他硬脂酸衍生物信号分子的前体，参与JA的生物合成。JA是植物防御反应中的重要调节子，可以激活多种植物防御反应相关基因的表达。PLA2参与了如脂代谢[3]#65380;炎症反应#65380;活性氧的产生[4]#65380;离子通道功能[5]#65380;生长素刺激生长[6]#65380;植物-病原物相互作用和抗逆境[7]等细胞的许多生理过程。1998年，Yusof等人[8]从橡胶树胶乳C-乳清中纯化得到一种类patatin蛋白，并在离体条件下证明它是橡胶合成的抑制因子，它阻碍异戊二烯分子的延长。同年，Sowka等人[9]对胶乳过敏原Hev b7进行cDNA克隆，发现它与patatin同源。Kostyal等人[10]认为这种与patatin同源的胶乳过敏原是一种PLA2。本文研究了割胶(机械伤害)#65380;外源JA及乙烯(利)(化学伤害)对橡胶树胶乳C-乳清中PLA2活性的影响，探讨了PLA2作为磷脂信号传导的重要组分，在植物防御反应中对割胶伤害#65380;外源JA及乙烯(利)刺激应答的关系，现将结果报告如下。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1 材料及处理 　　1.1.1 测定割胶伤害#65380;外源JA及乙烯利对橡胶树幼树胶乳中PLA2的影响 从本院试验农场十一队，选取1998年种植的25株无性系热研7-33-97橡胶幼树(试验前这些树从未受到割胶伤害)为试验对象。分别进行5种处理，各处理均为5株树，割制为S/2，d/3。一直不进行涂药处理的作为对照;处理1――初割前用2 g含0.08%外源JA的羊毛脂处理;处理2――初割前用2 g 1.5%的乙烯利糊剂处理;处理3――初割刀不进行涂药处理，初割后每个施药周期第1刀割胶前用2 g含0.08%的外源茉莉酸的羊毛脂处理;处理4――初割刀不进行涂药处理，初割后每个施药周期第1刀割胶前用2 g 1.5%的乙烯利糊剂处理。初割后每次涂药割3刀为一个施药周期，使用混合采样法取每个施药周期的第2刀样品。 　　1.1.2 测定不同浓度外源JA和不同剂量外源乙烯气体分别对橡胶树胶乳中PLA2的影响 以本院试验农场沙田队1990年种植的无性系PR107和热研7-33-97橡胶树为试验材料，JA刺激浓度分别为0%#65380;0.04%#65380;0.08%#65380;0.12%，割制为S/2，d/3。乙烯气体刺激剂量分别为0 mL#65380;10 mL#65380;30 mL#65380;80 mL，采用5cm短割线割胶，d/3。各处理均为5株树，每次处理后割3刀为一个施药周期，使用混合采样法取每个施药周期的第2刀样品。 　　1.1.3 测定相同浓度外源JA和乙烯利分别对橡胶树胶乳中PLA2变化的时间进程影响 以本院试验农场沙田队1991年种植的无性系热研7-33-97橡胶树为试验材料，进行2 g含0.08%外源JA的羊毛脂及2 g 1.5%的乙烯利糊剂处理，刺激时间分别为0 h#65380;6 h#65380;12 h#65380;24 h#65380;36 h#65380;48 h，割制为S/2，d/3。每时段刺激3株树，使用混合采样法取样。 　　1.2 测定方法 　　1.2.1 样品的采集 割胶后待割面杂质流尽开始收集30 min内流出的胶乳，然后将胶乳置于冰冻试管中，迅速带回实验室备用。