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响应面法优化佛手总黄酮提取工艺 　　摘要：以乙醇溶液为提取溶剂从佛手（Citrus medica var. sarcodactylis）中提取总黄酮，在单因素试验的基础上以佛手总黄酮提取率为指标，选择提取温度、提取时间和液料比3个因素进行Box-Behnken中心组合试验，优化佛手总黄酮的提取工艺条件。结果表明，优化的提取工艺条件为体积分数60%的乙醇溶液作提取溶剂、提取温度69 ℃、提取时间1.9 h、液料比V乙醇∶m佛手粉=32∶1 （mL/g）、提取2次，该条件下佛手总黄酮提取率为0.565 9%。 　　关键词：佛手（Citrus medica var. sarcodactylis）；总黄酮；提取工艺；响应面法 　　中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）07-1634-04 　　佛手（Citrus medica var. sarcodactylis）又名佛手柑，为常绿小乔木或灌木，是芸香科柑橘属植物香橼（C. medica）的变种，主要分布在我国浙江、广东、广西、福建、云南、四川和安徽等地，是传统的名贵中药材，全株均可入药[1-3]。佛手果性味辛、苦、甘、温，无毒，入肝、脾、胃、肺经，具有和胃健脾、舒肝理气、止咳化痰之功效，主治肝郁气滞、饮食不振、胃腹胀满、呕吐、咳嗽痰多、妇科疾病等[4-6]。研究表明佛手果中主要含有蛋白质、维生素、黄酮、多糖、香豆素类及其聚合体、有机酸、挥发油、矿物质等化学成分[7-11]，对防治胃癌、肝癌、肺癌，抑制肿瘤生长，扩张冠状血管、增加冠脉的血流量，减缓心率和降低血压，激活免疫细胞、改善机体免疫功能等也具有一定的功效[12-14]。目前对采用超声波法等对佛手总黄酮进行提取的研究已有报道[15，16]。本研究以乙醇溶液为浸提溶剂，在单因素试验的基础上应用响应面法对佛手总黄酮提取工艺条件进行优化，为进一步开发佛手产品和深入研究佛手化学成分的药理作用提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　中药佛手原产地为广东，购自安徽省亳州市药材市场，在电热恒温鼓风干燥箱中60 ℃烘干至恒重，粉碎过20目筛。用石油醚浸泡去色，重复3次，余下的固体粉末挥发干备用。乙醇、石油醚等试剂购自国药集团化学试剂有限公司（上海），芦丁标准品购自中国药品生物制品鉴定所。 　　主要试验设备有UV-2550型紫外分光光度计（日本岛津公司）、RE-5285A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）、TDL-4型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 佛手总黄酮提取工艺流程 称取佛手干粉5 g，置于三口瓶中，按试验设计条件加入一定量的乙醇溶液在一定温度下浸泡提取一定时间，离心并收集提取液，减压浓缩后定容，测定提取液中的总黄酮含量。 　　1.2.2 佛手总黄酮提取率的测定 以芦丁为标准品，参照文献[17]得到芦丁质量浓度（C）在5～40 mg/L范围内对其在363 nm波长处吸光度（A）的标准曲线回归方程为A=0.005 6+0.029 0C，r=0.999 8。测定佛手总黄酮提取液的吸光度A363 nm，计算其中的总黄酮含量，由下式得到佛手总黄酮的提取率。 　　佛手总黄酮提取率=提取液中总黄酮含量×稀释倍数×体积/原料质量×100%。 　　1.2.3 单因素试验 设置单因素试验分别考察乙醇溶液体积分数、液料比（V乙醇∶m佛手粉，mL/g，下同）、提取温度、提取时间和提取次数对佛手总黄酮提取率的影响。①乙醇溶液体积分数。在提取温度70 ℃、提取时间1 h、液料比25∶1、提取1次的条件下，分别以体积分数为40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液作为提取溶剂。②提取时间。在提取温度70 ℃、液料比25∶1、提取1次、体积分数60%的乙醇溶液作提取溶剂的条件下，提取时间分别为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 h。③提取温度。在液料比25∶1、提取1次、体积分数60%的乙醇溶液作提取溶剂、提取时间1 h的条件下，提取温度分别为50、60、70、80、90 ℃。④液料比。在提取1次、体积分数60%的乙醇溶液作提取溶剂、提取时间1 h、提取温度70 ℃的条件下，液料比分别为10∶1、20∶1、25∶1、30∶1、40∶1。⑤提取次数。在①～④优化的条件下分别提取1、2、3次。 　　1.2.4 Box-Behnken 试验设计 在单因素试验的基础上确定Box-Behnken设计的自变量，以佛手总黄酮提取率为响应值，通过响应面分析对提取条件进行优化。试验因素水平编码设计见表1，数据采用Design Expert 8.05统计软件分析。 　　2 结果与分析